izpis_h1_title_alt

Mehanizem delovanja in sodelovanja treh ključnih virulenčnih dejavnikov bakterije Listeria monocytogenes
ID Petrišič, Nejc (Avtor), ID Podobnik, Marjetka (Mentor) Več o mentorju... Povezava se odpre v novem oknu

.pdfPDF - Predstavitvena datoteka, prenos (15,33 MB)
MD5: 659CD03494957FA4A0DE271FCABB11AB

Izvleček
Listeria monocytogenes (Lm) je znotrajcelični bakterijski povzročitelj listerioze, potencialno smrtonosne okužbe, ki se prenaša s hrano. Trije glavni virulenčni dejavniki Lm so listeriolizin O (LLO) in dve fosfolipazi: širokospecifična fosfolipaza C (LmPC-PLC) in fosfatidilinozitol-specifična fosfolipaza C (LmPI-PLC). Glavni poudarek raziskav te doktorske naloge je bila funkcijska in strukturna analiza LmPC-PLC in njenih interakcij z LLO. Določili smo kristalno zgradbo LmPC-PLC in z dodatnimi biokemijskimi in biofizikalnimi eksperimenti smo pokazali dejavnike, ki regulirajo delovanje LmPC-PLC. Kristalna struktura razkriva, da je LmPC-PLC razvila več strukturnih posebnosti za uravnavanje svoje aktivnosti, vključno s položajem stranske skupine N-terminalnega triptofana (W1), strukturno plastičnim aktivnim mestom, od Zn2+ odvisno aktivnostjo in težnjo po tvorbi neaktivnih oligomerov. V nadaljevanju smo ugotovili aktivacijo LmPC-PLC s holesterolom, kar nakazuje na usmerjeno delovanje na gostiteljeve membrane. Opisali smo specifično inhibicijo LmPC-PLC z dodatkom njenega propetida in trans, kar odpira pot za razvoj specifičnih inhibitorjev, v namene zdravljenja okužb s sevi Lm, ki so odporni na antibiotike. Proučevali smo tudi sinergijo med LmPC-PLC in LLO ter ugotovili sinergistični vpliv LmPC-PLC na vezavo LLO na membrane in njegovo premabilizacijsko aktivnost. Ravno tako smo pokazali, da predinkubacija lipidnih membran z LmPC-PLC vpliva na morfologijo oligomerov, ki jih tvori LLO. Ta raziskava prinaša pomemben vpogled v strukturo in funkcijo LmPC-PLC, ki ima potencial kot terapevtska tarča pri zdravljenju listerioze, ter odkriva nove mehanizme sinergije med LmPC-PLC in LLO, kar znatno prispeva k razumevanju patofiziologije Lm.

Jezik:Slovenski jezik
Ključne besede:interakcije membranskih proteinov z membranami, listerijske fosfolipaze C, listeriolizin O, makromolekularna kristalografija, presevna elektronska mikroskopija pod krio pogoji, strukturne prilagoditve, Listeria monocytogenes
Vrsta gradiva:Doktorsko delo/naloga
Tipologija:2.08 - Doktorska disertacija
Organizacija:BF - Biotehniška fakulteta
Založnik:[N. Petrišič]
Leto izida:2024
PID:20.500.12556/RUL-156089 Povezava se odpre v novem oknu
UDK:66.095.261:66.065.5:543.442.3(043.3)
COBISS.SI-ID:194839299 Povezava se odpre v novem oknu
Datum objave v RUL:08.05.2024
Število ogledov:310
Število prenosov:88
Metapodatki:XML RDF-CHPDL DC-XML DC-RDF
:
Kopiraj citat
Objavi na:Bookmark and Share

Sekundarni jezik

Jezik:Angleški jezik
Naslov:Mechanism of action and sinergy between three main Listeria monocytogenes virulence factors
Izvleček:
Listeria monocytogenes (Lm) is the intracellular bacterial agent of listeriosis, a potentially fatal foodborne infection. The three main virulence factors of Lm are listeriolysin O (LLO) and two phospholipases: broad-range phospholipase C (LmPC-PLC) and phosphatidylinositol-specific phospholipase C (LmPI-PLC). The main research focus of this PhD thesis was the functional and structural analysis of LmPC-PLC and its interactions with LLO. We have determined the crystal structure of LmPC-PLC and through additional biochemical and biophysical experiments we have shown the factors that regulate the function of LmPC-PLC. The crystal structure reveals that LmPC-PLC has evolved several structural features to regulate its activity, including the position of the N-terminal tryptophan side group (W1), a structurally plastic active site, Zn2+-dependent activity, and a tendency to form inactive oligomers. Next, we found the activation of LmPC-PLC by cholesterol, which suggests a directed action on the host membranes. We described the specific inhibition of LmPC-PLC by the addition of its propetide in trans, which opens the way for the development of specific inhibitors for the treatment of infections with antibiotic-resistant strains of Lm. We also studied the synergy between LmPC-PLC and LLO and found a synergistic effect of LmPC-PLC on the binding of LLO to membranes and its premobilization activity. We also showed that preincubation of lipid membranes with LmPC-PLC affects the morphology of oligomers formed by LLO. This research provides important insight into the structure and function of LmPC-PLC, which has potential as a therapeutic target in the treatment of listeriosis, and uncovers new mechanisms of synergy between LmPC-PLC and LLO, which significantly contributes to the understanding of the pathophysiology of Lm.

Ključne besede:interactions of membrane proteins with membranes, listerial phospholipases C, listeriolysin O, macromolecular crystallography, CryoEM, structural adaptations, Listeria monocytogenes

Podobna dela

Podobna dela v RUL:
Podobna dela v drugih slovenskih zbirkah:

Nazaj