Kalcij (Ca2+) je vseprisotni sekundarni sporočevalec, ki nadzoruje različne celične funkcije. V tem pogledu epitelijske celice človeške leče (ECL) niso izjema, saj ima Ca2+ signalizacija pomembno vlogo pri homeostazi leče, motnje signalizacije Ca2+ pa povezujejo tudi s tvorbo sive mrene. Glavni cilj našega dela je bila identifikacija, analiza in primerjava medcelične signalizacije Ca2+ v človeških ECL, ob lokalni mehanski stimulaciji, brez in z dodatno apliciranima agonistoma apirazo (ATP difosfohidrolaza) in karbenoksolonom (CBX). Namen dodanih agonistov je bil določanje in boljše razumevanje parakrinega mehanizma in presledkovnih stikov pri komunikaciji med ECL. V našem poskusu smo uporabili sveže postoperativne lečne ovojnice (LO), pridobljene med operacijo katarakte, in primarne lečne kulture. ECL smo mehansko stimulirali s stekleno mikropipeto, kar je povzročilo povečanje znotrajcelične koncentracije Ca2+ ([Ca2+]i). Spremembe [Ca2+]i v citosolu smo spremljali s pomočjo fluorescentnega barvila Fura-2 in ugotovili, da se Ca2+ signal širi v obliki vala, radialno od točke stimulacije skozi celice v vidnem polju, ter da se amplitude [Ca2+]i zmanjšujejo s povečevanjem oddaljenosti od točke stimulacije. Analiza signalizacije Ca2+ v postoperativnih LO z dodanim CBX je pokazala, da je širjenje Ca2+ valov skoraj popolnoma onemogočeno, saj se aktivirajo samo celice v bližini stimulacijske točke. Po drugi strani pa apiraza ni imela znatnega vpliva na medcelično signalizacijo Ca2+ pri svežih postoperativnih LO. Poleg tega smo dodatno preučevali signalizacijo Ca2+ v primarni lečni kulturi. V tem primeru se je izkazalo, da apiraza bolj zablokira širjenje Ca2+ signala med celicami lečne kulture, medtem ko CBX v primerjavi s postoperativno lečo tukaj učinkuje manj. Ti rezultati nakazujejo, da bi lahko bila preizkušana farmakološka agonista učinkovito orodje pri regenerativni medicini, popravilu in regeneraciji leč.
|
