S kontinuirnim bioprocesom smo gojili sesalski celični liniji CHO K1 8mM L-Gln in CHO K1 0mM L-Gln. S konstantim pretokom medija skozi sistem smo ustvarili okolje, v katerem se lastnosti sistema s časom ne spreminjajo. To imenujemo stabilna faza sistema. S spreminjanjem pretoka skozi sistem smo celicam ustvarili različna stabilna okolja. Odziv celic na spreminjanje okolja smo ovrednotili z določanjem viablinosti kulture, celične gostote kulture, velikosti celic in stopnjo porabe/produkcije glutaminske kisline, glukoze, glutamina, amoniaka in laktata ter z meritvami metilacije DNA. Rezultati so pokazali, da spreminjanje okolja celic s pretokom vpliva na aktivnost celic, prav tako pa smo opazili razlike med testiranima celičnima linijama. Opazili smo tudi vpliv spreminjajočega okolja na metilacijo DNA, vendar razlik med celičnima linijama ni bilo opaziti. Namen naloge je bil tudi razviti metodo za določanje nivoja metilacije DNA z uporabo restrikcijskega encima odvisnega od metilacije DNA, HpaII, in barvanjem nastalih fragmentov s fluorescentnim barvilom, fluorescin-12-dUTP. Izkazalo se je, da je metoda obetaven način za določanje metilacije DNA, vendar bo za pridobitev natančnih rezultatov potrebna optimizacija. Težave, s katerimi smo se soočali, so bile določanje koncentracije DNA v barvanih vzorcih. To je ključno za natančno določitev nivoja metilacije DNA, saj je količina vezanega barvila odvisna od količine DNA v vzorcu. Prav tako smo za natančno določitev metilacije vključili encimski par MspI, ki je neodvisen od metilacije, vendar se je izkazalo da metilacija vseeno vpliva na aktivnost le-tega.
|
