Ozadje: Razvoj novih rekombinantnih biotehnoloških izdelkov se je močno razširil v sodobno farmacijo in medicino. Ker so biološke rekombinantne molekule občutljive in kompleksne beljakovine, je njihova funkcija močno odvisna od njihove strukture. Poleg njihove učinkovitosti lahko biološka zdravila povzročijo neželene učinke, kot je imunogenost. Zato je odkrivanje in karakterizacija strukturnih variant beljakovin bistvenega pomena pri razvoju in nadzoru kakovosti terapevtskih proteinov, ki bi lahko sprožili imunogeni odziv v organizmu. Metode: Doktorska disertacija vključuje predlagano detekcijo in karakterizacijo agregiranih in drugih modificiranih oblik monoklonskih protiteles (mAb) z uporabo izbranih kromatografskih in spektrometričnih metod. Poleg tega smo vzorce agregatov in modificiranih strukturnih variant monoklonskih protiteles izpostavili testu z nezrelimi dendritičnimi celicami (DC), ki izhajajo iz monocitov, za spremljanje aktiviranih celic DC in ugotavljanje potencialne imunogenosti strukturnih variant monoklonskega protitelesa. Ovrednotili smo tudi potencialni prirojeni imunogenski odziv kulture mononuklearnih celic periferne krvi (PBMC) v stiku z agregati mAb, in sicer z merjenjem vnetnega citokinskega odziva pri zgodnji izpostavitvi PBMC-jev različnim strukturnim oblikam monoklonskega protitelesa in z določanjem učinka agregatov mAb na proliferacijo dolgoživeče kulture PBMC-jev. Rezultati in sklep: Vse razvite in predlagane analitske metode in imunološka in vitro testiranja s celicami DC in PBMC bi se lahko uporabljala kot platforma za komplementarno analitsko karakterizacijo in določitev potenciala za imunogenost za vse biofarmacevtske izdelke, ki vsebujejo monoklonska protitelesa kot aktivne farmacevtske sestavine.
|
