Izbor peptidnih ligandov stafilokoknega proteina A iz bakteriofagnih peptidnopredstavitvenih knjižnicMasilo, Katja (Avtor)
Lunder, Mojca (Mentor)
protein A
stafilokokne okužbe
bakteriofagne knjižnice
peptidni ligandi
afinitetna selekcija
fagni kloni
diagnostikaStafilokokni protein A je protein, ki ga na svoji površini izraža bakterija Staphylococcus aureus. Z vezavo konstantne regije protiteles človeškega ali živalskega izvora bakteriji omogoča izogibanje pridobljenemu imunskemu odzivu gostitelja. Zaradi učinkovitih mehanizmov izogibanja imunskemu sistemu in odpornosti na številne antibiotike, znanstveniki iščejo nove načine zdravljenja stafilokoknih okužb. Ena izmed možnih strategij je ciljana dostava učinkovine do proteina A s pomočjo liganda, ki se veže nanj. Protein A je tudi široko uporaben v biotehnologiji kot imunokemijski reagent za identifikacijo ter čiščenje protiteles. V diplomski nalogi smo s pomočjo afinitetnih selekcij na streptavidinu in proteinu A iz dveh bakteriofagnih knjižnic poskušali izselekcionirati peptidne ligande, ki se vežejo na streptavidin oziroma protein A. V testni selekciji na streptavidinu smo izolirali klone z značilnim motivom HPQ z visoko afiniteto do streptavidina. V afinitetni selekciji na proteinu A z nespecifično elucijo smo iz knjižnice Ph.D.-C7C™ izolirali peptid CAKTDPRGC in s kvantitativno verižno reakcijo s polimerazo v realnem času potrdili specifičnost vezave na protein A. Peptid ima zelo podobno zaporedje kot konstantna regija protiteles, ki je naravni ligand proteina A. Selekcija iz knjižnice Ph.D.-C7C™ s specifično elucijo ni bila uspešna. V selekciji s specifično elucijo s konstantno regijo protiteles iz knjižnice Ph.D.-12™ pa smo izolirali peptide z izrazitim motivom GKL. S kvantitativno verižno reakcijo s polimerazo v realnem času smo potrdili vezavo peptidov GGKLTTIHLHST in GISDFMQTKMPL na protein A.[K. Masilo]20132015-07-10 14:28:53Diplomsko delo44271UDK: 543+547.96(043.2)COBISS_ID: 3395697sl