20.500.12556/RUL-174294 Optimizacija izolacije zunajceličnih veziklov pridobljenih iz različnih mezenhimskih matičnih celic za regeneracijo roženice Optimising the isolation of extracellular vesicles derived from different mesenchymal stem cells for corneal regeneration Raziskovali smo vpliv vira mezenhimskih matičnih celic (MSC), števila pasaž, trajanja inkubacije v brezserumskem mediju in postopka izolacije na količino pridobljenih zunajceličnih veziklov (EV). Gojili smo MSC iz kostnega mozga (BM-MSC), maščobnega tkiva (AT-MSC) in popkovine (UC-MSC), EV pa analizirali s pomočjo analize sledenja nanodelcev (NTA) in slikovne pretočne citometrije (IFC). Naši rezultati so pokazali, da imajo največji donos zunajceličnih veziklov UC-MSC, da daljša inkubacija v brezserumskem mediju (48 h) omogoča pridobivanje večjega števila EV v primerjavi s 24 h, da je višji donos EV v višjih pasažah ter da sta velikost in velikostna porazdelitev EV med različnimi viri in pasažami primerljivi. Dvojno ultracentrifugiranje s spiranjem je prineslo manjši donos EV v primerjavi z enojnim ultracentrifugiranjem. Primerjava rezultatov NTA in IFC je pokazala linearno korelacijo rezultatov obeh metod, čeprav smo z NTA dobili večje vrednosti. Pri postavljanju postopka za optimizacijo izolacije EV je potrebno upoštevati tudi tip MSC, pogoje gojenja in izbiro metode centrifugiranja. Pridobljeni podatki so pomembni za nadaljnjo uporabo EV v regenerativni medicini, med drugim tudi pri zdravljenju poškodb roženice. We investigated the impact of the mesenchymal stem cell (MSC) source, passage number, incubation time in serum-free medium, and isolation procedure on the yield of extracellular vesicles (EV). We cultured MSC from bone marrow (BM-MSC), adipose tissue (AT-MSC), and umbilical cord (UC-MSC), and analysed EV using nanoparticle tracking analysis (NTA) and imaging flow cytometry (IFC). Our results showed that UC-MSC produced the highest yield of extracellular vesicles, that prolonged incubation in serum-free medium (48 h) resulted in a higher number of EV compared to 24 h, and that higher passages yielded more EV. At the same time, EV size and size distribution were comparable across different sources and passages. Double ultracentrifugation with washing resulted in a lower EV yield compared to single ultracentrifugation. Comparison of NTA and IFC results revealed a linear correlation between both methods, although NTA yielded higher values. When establishing protocols for optimising EV isolation, it is essential to consider the MSC source, culture conditions, and the choice of centrifugation method. The obtained data are relevant for the further application of EV in regenerative medicine, including the treatment of corneal injuries. zunajcelični vezikli mezenhimske matične celice gojenje celic izolacija veziklov ultracentrifugiranje analiza sledenja nanodelcev slikovna pretočna citometrija extracellular vesicles mesenchymal stem cells cell culture vesicle isolation ultracentrifugation nanoparticle tracking analysis image flow cytometry true false false Slovenski jezik Angleški jezik Magistrsko delo/naloga 2025-10-01 07:16:10 2025-10-01 07:16:15 2025-11-20 03:36:45 0000-00-00 00:00:00 2025 0 0 0000-00-00 NiDoloceno NiDoloceno NiDoloceno 0000-00-00 0000-00-00 0000-00-00 267089 252087555 54196.pdf 54196.pdf 1 73D3621C0CC7F37D3B5919AD5AEDE2BC 20a07644f2bc640dca2b609281ff61bf380c970a073eca335290740ff3b2b84f 8ca07e0a-9e85-11f0-9328-0050569b8976 https://repozitorij.uni-lj.si/Dokument.php?lang=slv&id=219082 Biotehniška fakulteta 0 0 0