20.500.12556/RUL-159161 Uporaba kalmodulina za renaturacijo rekombinantnega encimsko neaktivnega mutanta amoditoksina A Refolding a recombinant enzymatically inactive mutant ammoditoxin A using calmodulin Amoditoksini (Atx) so sekretorne fosfolipaze tipa A2 (sPLA2) iz strupa modrasa (Vipera ammodytes ammodytes), ki imajo presinaptično nevrotoksično aktivnost, imenovano tudi β-nevrotoksičnost. Navkljub mnogim odkritjem v zadnjih letih mehanizem njihovega delovanja še ni v celoti poznan, prav tako ni pojasnjena vloga encimske aktivnosti Atx v tem procesu. Za namen študija le-te so raziskovalci razvili rekombinantni mutant AtxA(D49S), ki nima encimske aktivnosti. Omenjen mutant pridobivamo iz bakterij, kjer se odlaga v obliki inkluzijskih telesc, zato ga je potrebno zviti v nativno obliko (renaturacija) ter očistiti. Ker je izkoristek tega procesa običajno precej nizek, je bil cilj pričujočega dela izboljšati izkoristek renaturacije z uporabo kalmodulina (CaM), poznanega liganda Atx, v vlogi šaperona. S takšnim postopkom smo uspešno izolirali nativno zvit mutant AtxA(D49S), vendar je dobljeni izkoristek nižji od pričakovanega. Ammoditoxins (Atx) are type A2 secretory phospholipases (sPLA2) from the venom of the nose-horned viper (Vipera ammodytes ammodytes) with presynaptic neurotoxicity (β neurotoxicity). Despite many recent discoveries in this field, the underlying mechanism and the role of Atx's enzymatic activity therein remains poorly understood. To gain better insight, researchers have developed an enzymatically inactive recombinant mutant AtxA(D49S). Mutant variant is produced in bacteria, where it aggregates into insoluble inclusion bodies. Thus, it needs to be refolded and purified before use, but the yield of such refolding is usually quite low. The goal of our work was to improve the refolding yield using a known Atx ligand calmodulin (CaM) as a chaperone. We show that AtxA(D49S) can be successfully refolded using such an approach, however the resulting yield is lower than expected. amoditoksin kalmodulin renaturacija ammoditoxin calmodulin refolding true false false Slovenski jezik Angleški jezik Diplomsko delo/naloga 2024-07-02 12:14:52 2024-07-02 12:14:56 2024-07-13 03:27:10 0000-00-00 00:00:00 2024 0 0 0000-00-00 NiDoloceno NiDoloceno NiDoloceno 0000-00-00 0000-00-00 0000-00-00 23083 201142275 Merljak_Matevz_-_Uporaba_kalmodulina_za_renaturacijo_rekombinantnega_encimsko_neaktivnega_mutant.pdf Merljak_Matevz_-_Uporaba_kalmodulina_za_renaturacijo_rekombinantnega_encimsko_neaktivnega_mutant.pdf 1 7BAF2D50AF4B69E6DB3F42909209C300 5d0528a0dc7333fbf99208885d53f5ef009988989b810bdf1f2a5d7474933a30 edd11102-385b-11ef-926e-0050569b8976 https://repozitorij.uni-lj.si/Dokument.php?lang=slv&id=187094 Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo 0 0 0