Ligand-vezavne lastnosti hidrofobnega žepa EpCAM in njegov vpliv na regulirano intramembransko cepitevHočevar, Jošt (Avtor)
Pavšič, Miha (Mentor)
EpCAMregulirana intramembranska cepitevligandEpCAM je človeški transmembranski glikoprotein tipa I, ki se izraža na nizki ravni v epitelijskih celicah in na visoki ravni v številnih izvornih celicah. Poleg tega se izraža na visoki ravni v celicah različnih karcinomov. Zaradi slednje lastnosti je bil predlagan kot potencialna tarča pri zdravljenju nekaterih rakavih obolenj, razvita pa so bila številna terapevtska protitelesa. Obenem pa je naše razumevanje njegove vloge v celičnih procesih omejeno. Eksperimentalna določitev strukture zunajceličnega dela EpCAM je razkrila prisotnost hidrofobnega žepa na njegovi površini. Eden izmed mehanizmov, ki omogoča udeležbo proteina EpCAM v celičnih procesih, je regulirana intramembranska cepitev. Predpostavljamo, da hidrofoben žep igra vlogo pri regulaciji omenjenega mehanizma. V okviru diplomskega dela smo načrtali in pripravili mutantne oblike proteina EpCAM s fizično zaprtim hidrofobnim žepom in kvalitativno dokazali spremembe v regulirani intramembranski cepitvi. V okviru magistrskega dela smo te spremembe kvantificirali in analizirali spremembe v lokalizaciji mutantnih oblik. Slednje smo tudi izrazili v insektni celični liniji Sf9. Z očiščenimi proteini smo preučili ligand-vezavne lastnosti hidrofobnega žepa, tako in vitro kot tudi in silico. Opazili smo lokalizacijo mutantnih oblik na neznanih fibrilarnih strukturah in kvantificirali njihovo spremenjeno dovzetnost k regulirani intramembranski cepitvi. Dokazali smo tudi njihovo pravilno zvitje in vezanje z ligandi.20212021-03-04 16:00:00Magistrsko delo/naloga125113VisID: 9821COBISS_ID: 54022403sl