Ugotavljanje morebitne patogenosti mutacij gena ATG16L1 z uporabo humanizirane kvasovkePosinek, Matevž (Avtor)
Petrovič, Uroš (Mentor)
humanizirana kvasovkaCRISPR/Cas9alelavtofagijaMetoda z uporabo humanizirane kvasovke temelji na vstavitvi človeškega gena v sev kvasovke, ki ima izbit homolog človeškega gena, ki ga želimo testirati. Vstavljen človeški gen naj bi nadomestil funkcijo izbitega gena kvasovke, učinkovitost komplementacije pa lahko zaznamo s spremembo fenotipa kvasovke. Za nadomestitev lahko uporabimo tudi mutirane alele človeških genov in na osnovi sposobnosti komplementacije s strani mutiranih alelov napovedujemo, ali imajo mutacije negativen vpliv na normalno funkcijo gena. V sklopu naše raziskave smo želeli ugotoviti, ali lahko človeški gen ATG16L1 uspešno nadomesti funkcijo kvasovkinega homolognega gena ATG16. Gena sta udeležena v procesu avtofagije, mutacije v genu ATG16L1 pa so povezane s tveganjem za razvoj Chronove bolezni. V primeru uspešne komplementacije je bil naš naslednji cilj ugotoviti, če sta mutaciji 220G>A (Asp74Asn) in 898A>G (Thr300Ala) gena ATG16L1 škodljivi oziroma patogeni. Zamenjavo genov smo v delecijski mutanti laboratorijskega seva BY4741 atg16? izvedli s tehniko za urejanje genoma CRISPR/Cas9. Humaniziran sev smo nato podvgrli seriji fenotipskih testov in na osnovi rezultatov ugotovili, da gen ATG16L1 ni sposoben nadomestiti funkcije kvasovkinega gena ATG16. Nadaljnje ugotavljanje škodljivosti mutacij gena ATG16L1 z uporabo humanizirane kvasovke posledično ni bilo mogoče.20192019-09-26 07:45:04Magistrsko delo/naloga111195VisID: 170813COBISS_ID: 5329231sl