Ločevanje izooblik monoklonskih protiteles z induciranim prehodom pHŠedivy, Maja (Avtor) Podgornik, Aleš (Mentor) monoklonska protitelesazaključni procesiionska izmenjevalna kromatografijapH-vrednostinduciran prehod pHločevanje s spremembo pHKromatografske metode zagotavljajo visoko stopnjo čistosti biotehnološko pridobljenih proteinov. Najpogosteje se proteine spira z raztopino soli. Čiščenje s spremembo v pH-vrednosti mobilne faze je teže nadzorovati, vendar je zelo privlačno, saj naknadno odstranjevanje soli ni potrebno. Možnost lažje kontrole prehodov pH pri izolaciji so pokazale mešane kolone, sestavljene iz kombinacije močnih in šibkih ionskih izmenjevalcev. Namen magistrskega dela je bilo ustvariti položen inducirani prehod pH, ki ga dosežemo s preklopom mobilnih faz z različnim pH. Na osnovi induciranega prehoda pH smo testirali ločevanje izooblik monoklonskih protiteles (mAb). Mešano kolono smo naredili z izborom ustreznih ionskih izmenjevalcev: šibki z izjemno majhnimi porami, v katere proteini ne morejo vstopati, namenjen tvorjenju induciranega prehoda pH, in porozen močni, namenjen vezavi tarčnih proteinov. Dvojna funkcija mešane kolone je omogočila ustvarjanje stabilnega prehoda pH z visoko kapaciteto za izbran protein. Kombinacija z različnimi mobilnimi fazami je pokazala, da lahko s koncentracijo in pH-vrednostjo pufra dobro kontroliramo položnost prehoda pH. Šibki (AG® 4-x4) in močni (Fractogel® EMD TMAE Hicap (M)) anionski izmenjevalec sta tako posamezno kot tudi v mešanici delovala dobro, medtem ko z intermediatnim izmenjevalcem (Bio-RexTM 5) nismo dobili pozitivnih rezultatov. Ločevanje izooblik mAb je bilo delno uspešno. V prihodnje bi bilo treba najti optimalno razmerje ionskih izmenjevalcev v mešani koloni in ustrezen pufrski sistem, ki bi omogočal boljše ločevanje različic mAb.[M. Šedivy]20172017-12-24 07:16:24Magistrsko delo/naloga99153UDK: 602.44:543.544.17:577.112(043.2)VisID: 150667COBISS_ID: 8894329sl