Vrednotenje izbranih promotorjev bakterije Streptomyces rimosus s pomočjo poročevalskega gena xylEBuzar, Ilija (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Paš, Maja (Komentor) aktinomicetestreptomiceteStreptomyces rimosusEMC operonplazmiditetRStreptomyces rimosus je ena izmed najbolj raziskanih industrijsko pomembnih streptomicet. Znana je predvsem kot proizvajalka oksitetraciklina. Za optimizacijo metabolnih poti z namenom izboljševanja donosa sekundarnih metabolitov je pomembno poznavanje regulacije izražanja genov vpletenih v te biosintezne poti. Pot etilmalonil-CoA omogoča bakteriji rast na acetatu kot edinemu viru ogljika, geni za to pot pa se skupaj z genom tetR nahajajo v operonu emc. Pri nekaterih bakterijah je znana tudi vloga regulatornega proteina TetR v tej poti, saj regulira izražanje gena ccr. V obsegu magistrske naloge smo ovrednotili vlogo tetR, ki se nahaja v emc operonu. Gen tetR smo prekomerno izrazili in testirali ali ima acetat vpliv na izražanje tega gena. V prvem delu naloge smo ovrednotili aktivnosti promotorjev PermE*, PoxyI, Phs in Ptg. Homolog gena tetR smo konstruirali tako, da smo tetR postavili pod promotor PermE*, ki se je izkazal za najmočnejšega. Nato smo tako konstruiran gen tetR klonirali v integrativni vektor pAB15. Le-tega smo nato transformirali v seve S. rimosus, v katerih se pred poročevalskim genom xylE z zapisom za encim katehol 2,3-dioksigenazo že v kromosomu nahajajo promotorske regije Pemc iz bakterij vrst Streptomyces rimosus in Streptomyces tsukobaensis. Transformirane celice smo gojili v gojiščih TSB in GOTC in s pomočjo poročevalskega gena xylE vrednotili vpliv regulatornega proteina TetR in dodanega acetata v obeh gojiščih. V obeh gojiščih nismo zaznali razlike med aktivnostjo promotorjev pri sevih ki so vsebovali Pemc brez regulatornega proteina TetR, aktivnostjo promotorjev Pemc s kloniranim genom tetR. Opazili pa smo rahlo pozitivno povečanje aktivnosti promotorjev Pemc s kloniranim genom tetR in dodatkom acetata v gojišču, vendar razlike niso bile statistično značilne.[I. Buzar]20172017-10-29 07:15:22Magistrsko delo/naloga97614UDK: 602.6:602.3:579.873VisID: 150020COBISS_ID: 4849272sl