Genska transformacija rastline Nicotiana benthamiana DominPregelj, Jana (Avtor) Murovec, Jana (Mentor) tobakNicotiana benthamianagenska transformacijaCas9V nalogi smo potrdili, da sta mogoča prenos in stabilna transformacija genov Cas9, Hpt II in ZsGreen v rastlino Nicotiana benthamiana, ki je vse bolj pomembna kot modelni organizem. Gensko transformacijo smo izvedli s pomočjo bakterije Agrobacterium tumefaciens, s katero smo kokultivirali listne izsečke in katera je omogočila vnos izbranih genov v rastlino. Adventivno regeneracijo transgenih poganjkov smo izvedli na trdnem gojišču Murashige in Skoog, ki smo mu dodali 0,1 mg l-1 avksina 1-naftalenocetne kisline (NAA), 1 mg l-1 citokinina 6-benzilaminopurina (BAP), 30 g l-1 saharoze, 150 mg l-1 timentina, 25 mg l-1 higromicina in 8 g l-1 agarja. Uspešnost transformacije smo v T0 generaciji preverili s PCR pomnoževanjem in agarozno gelsko elektroforezo, ki je sicer pokazala uspešnost prenosa genov, a je poleg tega pokazala tudi na prisotnost ostankov bakterije Agrobacterium tumefaciens. Zato smo se odločili za aklimatizacijo vseh rastlin, pri katerih so bili prisotni želeni geni, kljub prisotnosti vir genov. Stabilno transformacijo smo potrdili v T1 generaciji, s pomočjo katere smo potrdili prisotnost želenih genov in njihovo dedovanje v naslednjo generacijo. Molekulsko analizo smo v tem primeru izvedli s pomočjo KAPA3G Plant PCR kit, ki nam je omogočil hitrejše in boljše rezultate, saj je močno skrajšal pot od rastlinskega vzorca do rezultata.[J. Pregelj]20172017-10-07 07:15:25Magistrsko delo/naloga96648UDK: 577.2:601.4:633.71(043.2)VisID: 146689COBISS_ID: 8799097sl