Vpeljava modernega diagnostičnega pristopa za dokaz babezij v kliničnih in živalskih vzorcihCaf, Nika (Avtor) Avšič Županc, Tatjana (Mentor) Korva, Miša (Komentor) babeziozaprenašalcigostiteljiklopiparazitologijababezijemikrobiološke metodePCRPCR v realnem časudigitalni PCRBabezija je parazit, ki se s klopom prenese na ljudi in živali, kjer lahko povzroči okužbo. Zlati standard dokazovanja babezioze je neposredni mikroskopski pregled barvanega krvnega razmaza, s katerimi ne moremo določiti babezije do vrste natančno. Babeziozo lahko dokažemo tudi z metodo posredne imunofluorescence, ki pa ni primerna pri imunsko oslabljenih bolnikih. Z magistrsko nalogo smo razvili PCR v realnem času za dokaz DNA babezij, ki povzročajo okužbe pri ljudeh in živalih v Sloveniji in s tem olajšali ter skrajšali čas do laboratorijskega izvida. Dokazali smo, da je metoda PCR v realnem času bolj občutljiva in bolj specifična od neposrednega mikroskopskega pregleda preparata krvi ter klasičnega PCR. Kot selekcijski marker smo uporabili gen 18S rRNA, ki vsebuje hipervariabilne odseke, obdane z visoko ohranjenimi regijami. Razvili smo visoko specifičen in občutljiv PCR v realnem času, ki pomnožuje sev humane babezije Babesia sp. Irk, ki so ga dokazali leta 2014 pri imunsko oslabljeni bolnici iz Prekmurja. S kvantifikacijo z digitalnim PCR smo spremljali potek parazitemije in zdravljenja pri bolnici ter dokazali babezijsko DNA tudi po 89. dneh zdravljenja, ko so bili rezultati ostalih metod že negativni. Zaključimo lahko, da je PCR v realnem času hitra, visoko občutljiva in enostavna metoda, ki omogoča dokaz babezioze v zgodnjih fazah bolezni ter spremljanje poteka zdravljenja.[N. Caf]20172017-09-21 07:57:39Magistrsko delo/naloga95707UDK: 616.993.19:579.67.083VisID: 144653COBISS_ID: 4818552sl