Infektivnost virusa zelene lisavosti in mozaika kumar ter virusa blage lisavosti paprike v vodnih vzorcih vtoka v čistilno napravo Domžale - KamnikBačnik, Katarina (Avtor) Dermastia, Marina (Mentor) Ravnikar, Maja (Komentor) rastlinski virusitobamovirusivirus zelene lisavosti in mozaika kumarvirus blage lisavosti paprikeinfektivnost rastlinskih virusovodpadne vodekoncentriranje virusovmehanska inokulacijamolekularne metodeRT-PCRelektronska mikroskopijaAnalizirali smo vzorec vtoka v čistilno napravo Domžale - Kamnik, da bi ugotovili, če so v vzorcu prisotni patogeni rastlinski virusi. Osredotočili smo se na prisotnost virusa zelene lisavosti in mozaika kumar (Cucumber green mottle mosaic virus; CGMMV) in virusa blage lisavosti paprike (Pepper mild mottle virus; PMMoV). Glavni namen raziskave je bil ugotoviti, ali so virusi CGMMV in PMMoV iz vzorca vtoka, ki smo jih skoncentrirali z uporabo monolitnih kromatografskih nosilcev CIM, infektivni. Prisotnost virusov smo dokazovali z metodo reverzne transkripcije in verižne reakcije s polimerazo v realnem času in ugotovili, da se je njihova koncentracija po koncentriranju osnovnega vzorca povečala za dva velikostna razreda. Infektivnost virusov smo preverjali z mehansko inokulacijo testnih rastlin. Kljub temu, da smo z molekularnimi metodami po koncentriranju dokazali visoke koncentracije virusne RNA in z elektronsko mikroskopijo pokazali nepoškodovane virusne delce, se v razmerah, katerim so bili virusi predhodno izpostavljeni, ni ohranila zadostna koncentracija nepoškodovanih virusov, ki bi lahko uspešno okužili testne rastline. Z rezultati dodatnih kontrol okuževanja smo izključili prisotnost NaCl v vzorcu po koncentriranju z gradientno elucijo kot razlog za odsotnost infektivnosti. Prav tako lahko kot razlog za odsotnost infektivnosti izključimo prisotnost snovi, ki se koncentrirajo skupaj z virusi, saj so dodani infektivni virusi ohranili sposobnost okužbe testnih rastlin. Na celovitost in infektivnost virusov v vzorcu vtoka v čistilno napravo bi lahko vplivale številne snovi, katerim so bili virusi izpostavljeni še pred vzorčenjem in koncentriranjem. V nadaljnjih raziskavah predlagamo uporabo predkolone v postopku koncentriranja virusov in takojšnjo inokulacijo testnih rastlin brez vmesnega zamrzovanja elucijskih frakcij.[K. Bačnik]20172017-09-21 07:53:20Magistrsko delo/naloga95638UDK: 632.38:578.865:57.083.2VisID: 143404COBISS_ID: 4818808sl