Meritve znotrajcelične koncentracije cAMP in laktata v kulturi podganjih astrocitov po aktivaciji receptorjev prostih maščobnih kislinSkubic, Cene (Avtor) Vardjan, Nina (Mentor) Kreft, Marko (Komentor) metabolizem/astrociti/oleinska kislina/TAK875/GPR40/cAMP/FRET/Ca2+Astrociti imajo številne pomembne funkcije v centralnem živčnem sistemu. Med njimi je sodelovanje pri metabolizmu, saj presnavljajo glukozo v laktat, ki ga lahko nato posredujejo nevronom. Metabolizem astrocitov je natančno uravnan s strani z G-proteini sklopljenih receptorjev, med katere uvrščamo tudi receptor GPR40, ki je receptor za proste maščobne kisline. Ker vpliv aktivacije GPR40 na znotrajcelične signalne poti in metabolizem astrocitov v centralnem živčnem sistemu še ni raziskan, je bil namen te naloge ugotoviti, kako agonista teh receptorjev, endogeni neselektivni agonist oleinska kislina in sintetični selektivni agonist TAK875, vplivata na znotrajcelično koncentracijo sekundarnih obveščevalcev Ca2+ ter cAMP in metabolita laktata v kortikalnih astrocitih v kulturi. Z uporabo fluorescenčnega Ca2+-indikatorja Fluo4-AM in fluorescenčne mikroskopije v realnem času smo ugotovili, da oleinska kislina in TAK875 neposredno ne spremenita znotrajcelično raven Ca2+ v podganjih astrocitih v kulturi. Z uporabo gensko kodiranih FRET (Förster resonance energy transfer)-nanosenzorjov Epac1-camps za cAMP in Laconic za laktat ter FRET-mikroskopije, smo ugotovili, da oleinska kislina in TAK875 povzročita porast v znotrajcelični koncentraciji cAMP in laktata v astrocitih. Sklepamo lahko, da agonista receptorjev GPR40: oleinska kislina in TAK875 aktivirata signalno pot preko Gs-proteina in s tem adenilatno ciklazo, kar povzroči porast koncentracije cAMP. Ta v nadaljevanju vpliva na protein-kinazo A, kar lahko aktivira razgradnjo glikogena in aerobno glikolizo v astrocitih. Predvidevamo, da imajo receptorji GPR40 na površini astrocitov pomembno vlogo pri uravnavanju metabolizma v centralnem živčnem sistemu, saj v astrocitih aktivirajo produkcijo laktata, ki se lahko razširi po astrocitnem sinciciju ter izloči v zunajceličnino in nato v nevronih uporabi kot metabolni substrat.20172017-06-11 07:15:32Magistrsko delo/naloga92551VisID: 130768sl