Določanje vezave protiteles razreda E na mimotope glavnega mačjega alergena in optimizacija imunodetekcijeDemšar Luzar, Ajda (Avtor) Lunder, Mojca (Mentor) alergensko specifična imunoterapija mimotopi alergena Fel d 1 SDS-PAGE prenos western iBindAlergije so v razvitih državah vedno bolj razširjene. Zdravimo jih lahko na tri načine: z izogibanjem alergenom, s farmakoterapijo in z imunoterapijo. Alergensko specifična imunoterapija je edini kurativni pristop k zdravljenju alergij. V imunoterapiji lahko uporabimo različne pristope zdravljenja. Trenutno se uporabljajo predvsem ekstrakti alergenov ali rekombinantno pridobljeni alergeni. Ker lahko uporaba celotnega alergena vodi do pojava anafilaksije, je vedno več raziskav usmerjenih v razvoj krajših peptidov, ki predstavljajo ali posnemajo dele alergena. Takim peptidom pravimo mimotopi. V diplomski nalogi smo poskušali določiti vezavo specifičnih protiteles razreda E na mimotope glavnega mačjega alergena Fel d 1, izražene na nitastih bakteriofagih M13, ter primerjali, katera metoda imunodetekcije je najprimernejša in najbolj uporabna. Bakteriofage z izraženimi mimotopi smo pomnožili. Pripravili smo vzorce s primerno koncentracijo. Kot kontrolo smo uporabili bakteriofag brez izraženih peptidov na plaščnih proteinih. Z metodo poliakrilamidna gelska elektroforeza v prisotnosti natrijevega dodecilsulfata smo po velikosti ločili plaščne proteine bakteriofaga. Proteine smo nato s prenosom western prenesli na nitrocelulozno membrano. Primerjali smo dva načina imunodetekcije - klasično metodo inkubacije membrane s protitelesi ter metodo z uporabo aparature iBind. Ugotovili smo, da se protitelesa razreda E vežejo na vse izražene peptidne mimotope. V majhni meri so se protitelesa vezala tudi na kontrolni bakteriofag. Predpostavljamo, da zaradi nespecifične vezave protiteles na bakteriofagne plaščne proteine. Ugotovili smo, da predhodno čiščenje seruma in predhodna inkubacija seruma s kontrolnimi bakteriofagi ne izboljšata rezultatov imunodetekcije. Izkazalo se je, da imajo tudi zdravi prostovoljci majhne količine specifičnih imunoglobulinov E, ki se v majhni meri vežejo na peptidne mimotope oziroma direktno na plaščne proteine bakteriofagov. Ugotovili smo, da je imunodetekcijska metoda z aparaturo iBind bolj uporabna kot klasična metoda inkubacije membrane s protitelesi. Metoda iBind se je izkazala za enostavnejšo in hitrejšo. [A. Demšar]20152016-04-08 18:35:48Diplomsko delo/naloga81244UDK: 616-056.43:636.8(043.2)COBISS_ID: 3911281sl