Sinteza in vrednotenje nove fluorescenčne sonde za test fluorescenčne polarizacije za rešetanje zaviralcev galektina-8Kojek, Zala (Avtor) Anderluh, Marko (Mentor) Purić, Edvin (Komentor) galektin-8zaviralci galektina-8fluorescenčna sondatest fluorescenčne polarizacijerešetanje visoke zmogljivostiGalektin-8 je zaradi vpletenosti v različne patofiziološke procese, vključno z razvojem raka, zanimiva tarča za razvoj novih zdravilnih učinkovin. Osrednji cilj magistrske naloge je bila sinteza fluorescenčne sonde za razvoj kompetitivnega testa fluorescenčne polarizacije, namenjenega iskanju selektivnih zaviralcev galektina-8 z rešetanjem visoke zmogljivosti. Z reakcijo klik kemije, natančneje z bakrom(I) katalizirano azid-alkin cikloadicijo, sta bili pripravljeni dve novi fluorescenčni sondi. Obe sta vsebovali enak del, ki se veže na galektin-8, razlikovali pa sta se v fluoroforu: ena je vsebovala BODIPY, druga pa fluorescein. Spektroskopsko vrednotenje fotofizikalnih lastnosti obeh sond je obsegalo preučevanje ekscitacijskih in emisijskih spektrov ter določitev odvisnosti intenzitete fluorescence od koncentracije sonde. Z neposrednim testom fluorescenčne polarizacije smo ovrednotili afiniteto obeh sond do galektina-8. Test temelji na merjenju polarizacije fluorescenčne svetlobe, ki jo sonda odda po vzbujanju. Stopnja polarizacije je odvisna od hitrosti vrtenja fluorescenčne sonde, ta pa je povezana z njeno velikostjo. Prosta sonda se v raztopini hitro vrti, zato se oddana svetloba v večji meri depolarizira. Po vezavi na galektin se sonda vrti počasneje, zaradi česar se polarizacija poveča. S spremljanjem povečevanja fluorescenčne polarizacije v odvisnosti od koncentracije galektina lahko določimo afiniteto vezave sonde. Za preučevanje selektivnosti smo ovrednotili vezavo obeh sond tudi na sorodna galektin-3 in galektin-1. Obe sondi sta izkazali primerljivo visoko afiniteto do tarčnega galektina-8. Fluoresceinska sonda je izkazala nižjo afiniteto do galektina-1 in galektina-3, medtem ko so bili rezultati meritev z BODIPY sondo manj zanesljivi. S kompetitivnim testom fluorescenčne polarizacije s tremi znanimi zaviralci galektina-8 smo preverili primernost fluoresceinske sonde za uporabo pri rešetanju visoke zmogljivosti. Vsi trije zaviralci so koncentracijsko odvisno izpodrivali sondo iz kompleksa z galektinom-8. Določene afinitete zaviralcev so bile primerljive z objavljenimi vrednostmi, pridobljenimi s tetrasaharidno fluorescenčno sondo. Izračunane vrednosti faktorjev Z in Z′ so podprle primernost kompetitivnega testa za rešetanje visoke zmogljivosti.[Z. Kojek]20262026-10-13 08:45:44Magistrsko delo/naloga189695UDK: 615.4:54VisID: 133354COBISS_ID: 300977155sl