Vzpostavljanje pristopa za nevirusno urejanje genoma človeških celic γδ T s sistemom CRISPR/Cas9Ortl, Larisa (Avtor) Smole, Anže (Mentor) Pohar, Jelka (Komentor) celice gama delta Tpreurejanje genomaCRISPR/Cas9pretočna citometrijaV magistrskem delu smo razvili nevirusni pristop za urejanje genoma človeških celic γδ T z uporabo sistema CRISPR/Cas9 in ribonukleoproteinskih (RNP) kompleksov ter ovrednotili možnosti usmerjenega izbitja receptorja γδ TCR. Namen raziskave je bil vzpostaviti eksperimentalno osnovo za genski inženiring celic γδ T ter določiti učinkovitost različnih enojnih usmerjevalnih RNA (sgRNA). Z bioinformatskimi orodji smo načrtovali šest sgRNA, usmerjenih proti genom, ki kodirajo verige receptorja γδ TCR, njihovo učinkovitost pa nato eksperimentalno ovrednotili. Rezultati so pokazali, da se učinkovitost posameznih sgRNA razlikuje tudi pri usmerjenosti proti istemu genu, kar poudarja pomen izbire ustreznega tarčnega mesta in eksperimentalne validacije. Ugotovili smo, da kakovost začetnega biološkega materiala vpliva na delitev in živost celic po elektroporaciji. Analiza s pretočnim citometrom je pokazala postopno zmanjševanje izražanja γδ TCR po urejanju genoma, kar nakazuje na uspešnost izbitja tarčnih genov. Rezultati kažejo, da uporaba CRISPR/Cas9 in RNP kompleksov predstavlja izvedljiv pristop za nevirusno urejanje genoma človeških celic γδ T. Vzpostavljena metodologija lahko služi kot osnova za nadaljnje raziskave genskega inženiringa celic γδ T ter za razvoj potencialnih biomedicinskih aplikacij.20262026-09-27 07:16:34Magistrsko delo/naloga188753VisID: 292651sl