Vzpostavitev metode izolacije in transformacije protoplastov konoplje (Cannabis sativa)Krnc, Andraž (Avtor) Murovec, Jana (Mentor) Cannabis sativaprotoplastiizolacijatransformacijapreurejanje genomakanabinoidiPreurejanje genoma protoplastov konoplje (C. sativa L.) je pomembno orodje za doseganje produkcije želenih sekundarnih metabolitov. Cilj naše raziskave je bil vzpostaviti učinkovit protokol izolacije in transformacije protoplastov konoplje, pri čemer smo želeli preveriti vpliv različnih dejavnikov. Primerjali smo uporabo različnih genotipov konoplje, načinov gojenja izbranega rastlinskega tkiva ter pogoje encimolize. Z optimizacijo teh parametrov smo uspeli iz 1 g rastlinskega materiala izolirati od 2,0*10⁶ do 1,2*10⁷ protoplastov z živostjo med 65 in 75 %, kar je več v primerjavi z rezultati drugih raziskovalcev, ki so protoplaste izolirali iz konoplje, in rezultati nekaterih drugih rastlinskih vrst. Pri protokolu transformacije smo preverjali vpliv koncentracije plazmida in PEG na živost protoplastov ter časa tretiranja protoplastov na uspešnost transformacije protoplastov. Ugotovili smo, da plazmid in PEG nimata negativnega vpliva na živost protoplastov. Zaradi pojava avtofluorescence protoplastov smo za ugotavljanje uspešnosti transformacije izvedli qPCR analizo izražanja gena gfp in ugotovili, da je bila transformacija uspešna, saj smo v vseh vzorcih zaznali povečano izražanje gena gfp v primerjavi s kontrolo, čas tretiranja pa na uspešnost transformacije ni imel vpliva.20262026-09-16 07:17:52Magistrsko delo/naloga187880VisID: 289327COBISS_ID: 291281667sl