Strukturni vpogled v interakcijo med 3'-UTR mRNA LRP5 in miR-629-3pMoškrič, Anja (Avtor) Lenarčič Živković, Martina (Mentor) Plavec, Janez (Komentor) G-kvadrupleksLRP5miR-629-3pNMR spektroskopijaKoreceptor LRP5 sodeluje v kanonični Wnt/β-kateninski signalni poti, ki je pomembna za diferenciacijo osteoblastov in nastajanje kosti. Motnje v njegovem izražanju so povezane z boleznimi, kot so osteoporoza, hiperostoza in osteoporozni psevdogliomski sindrom. V magistrskem delu smo se osredotočili na uravnavanje izražanja LRP5 na ravni mRNA. V 3'-UTR mRNA LRP5 se nahaja z gvanini bogato zaporedje, ki se lahko zvije v G-kvadrupleks in vpliva na translacijo LRP5. V neposredni bližini tega zaporedja se hkrati veže več miRNA, ki so znani regulatorji translacije. Preučili smo, ali tvorba G-kvadrupleksa vpliva na dostopnost vezavnega mesta za miRNA ter kako vezava miRNA na mRNA vpliva na ravnotežje med G-kvadrupleksom in dupleksom. Z NMR in komplementarnimi spektroskopskimi metodami smo strukturno preučili z gvanini bogato zaporedje iz 3'-UTR mRNA LRP5 ter analizirali vpliv vezave izbranih miRNA. Najprej smo pokazali, da se z gvanini bogato zaporedje LRP5 neodvisno od dolžine preučevanega konstrukta v prisotnosti kalijevih ionov zvije v termično stabilen trikvartetni G-kvadrupleks s paralelno topologijo. Med izbranimi miRNA smo interakcijo z zaporedjem mRNA LRP5 zaznali predvsem pri miR-629-3p, katere vezavno mesto se prekriva z z gvanini bogatim območjem. S titracijami ter eksperimenti segrevanja in ohlajanja smo pokazali, da miR-629-3p vpliva na strukturno ravnotežje med G-kvadrupleksom in dupleksom ter ga postopoma pomakne proti dupleksu. Rezultati kažejo, da miR-629-3p najprej tvori bazne pare s 3'-podaljškom G-kvadrupleksa, nato pa se bazno parjenje postopoma razširi na preostali del z gvanini bogatega zaporedja, kar spremlja zmanjševanje deleža G-kvadrupleksa. Z načrtnim povečevanjem komplementarnosti med mRNA in modelnimi miRNA smo dodatno pokazali, da večje število komplementarnih baznih parov poveča delež dupleksa. Nazadnje smo z eksperimenti v lizatu celic HeLa pokazali, da se v pogojih makromolekulske gneče ohranita tako G-kvadrupleks kot dupleks.20262026-09-14 13:35:01Magistrsko delo/naloga187790VisID: 25642COBISS_ID: 303052035sl