Preskušanje plazmidov za izražanje toksinov namenjenih cepljenju proti rakuLovišček, Kristijan (Avtor) Kamenšek, Urška (Mentor) in situ cepljenjegenski elektro prenosplazmidtvorba portoksinZačetki imunoterapije raka segajo v konec 19. stoletja, ko je William B. Coley uvedel pristop intratumorskega injiciranja s toploto inaktiviranih bakterij, ki proizvajajo toksine. Ena najbolj obetavnih imunoterapevtskih strategij je cepljenje in situ, ki se opira na lokalno ablacijo tumorja, da sproži tumorsko specifičen imunski odziv s sproščanjem tumorskih antigenov iz umirajočih rakavih celic. V sklopu magistrske naloge smo ovrednotili osnovno funkcionalnost plazmidov z zapisom za bakterijske toksine, namenjenih in situ protitumorskem cepljenju z genskim elektroprenosom (GEP, angl. gene electrotransfer). Z uporabo reporterskega sistema z izboljšanim zelenim fluorescenčnim proteinom (EGFP, angl. enhanced green fluorescent protein) smo primerjali učinkovitost sekrecijskih signalov iz genov za interlevkin 2 in perforin 1 ter določali izražanje plazmidov za izražanje porotvornih toksinov in superantigenih toksinov. Plazmide smo transfecirali v celično linijo mišjega melanoma B16F10, izražanje EGFP smo določali s slikanjem fluorescence, izražanje toksinov s kvantitativnim PCR, citotoksičnost pa s testom PrestoBlueTM. Rezultati so pokazali učinkovito sekrecijo pri konstruktu s sekrecijskim signalom PRF1 ter uspešno transkripcijo vseh analiziranih toksinov v transfeciranih celicah. Ugotovitve potrjujejo primernost pripravljenih plazmidov za nadaljnje raziskave terapevtske učinkovitosti pri in situ protitumorskem cepljenju.[K. Lovišček]20262026-09-13 07:17:04Magistrsko delo/naloga187685UDK: 615.37:602.68:577.27VisID: 289008COBISS_ID: 290906883sl