Karakterizacija limfocitov T po aktivaciji z novim aktivacijskim reagentom in ocena njihove primernosti za terapije CAR-TKravanja, Aljaž (Avtor) Erdani Kreft, Mateja (Mentor) Jež, Mojca (Komentor) aktivacijalimfociti Tterapije CAR-Tpretočna citometrijadiferenciacijamitohondrijiTerapije CAR-T se vse bolj uveljavljajo v zdravljenju onkoloških obolenj, njihova učinkovitost in varnost pa sta delno odvisni od postopka priprave celic. Aktivacija limfocitov T je eden od ključnih korakov v pripravi terapevtskih pripravkov. V magistrskem delu smo proučevali novo razvit aktivacijski reagent Atract™ T-Cell (v nadaljevanju Atract™ Kit) ter ocenjevali njegovo primerljivost z že uveljavljenim reagentom na trgu. Prvi cilj je bil s pretočno citometrijo spremljati aktivacijo limfocitov T prek merjenja izražanja površinskih označevalcev; drugi cilj dela preveriti metabolni odziv celic na aktivacijo prek spremljanja mitohondrijske mase; tretji cilj pa preveriti vpliv citokinov v gojitvenem mediju na diferenciacijo celic, ob vpeljavi naprednih računalniških metod v analitični postopek. Vsi poskusi so bili izvedeni na svežih PBMC, izoliranih iz polne krvi darovalcev. Atract™ Kit je dosegel primerljiv aktivacijski profil kot uveljavljeni reagent, prav tako pa smo pokazali metabolni odziv limfocitov T na aktivacijo, ki se je odražal v povečanju mitohondrijske mase po stimulaciji. Poskus diferenciacije limfocitov T s citokini ni pokazal razlik med gojitvenimi pogoji, saj sta tako klasična analiza kot računalniško določanje stopenj diferenciacije s psevdočasom pokazala podobno fenotipsko sestavo populacij. Na podlagi rezultatov optimalnega pogoja za gojenje manj diferenciranih celic, primernejših za terapije CAR-T, nismo mogli določiti. S poglobljeno uporabo računalniških analitskih orodij pa smo prepoznali njihov potencial za temeljitejšo karakterizacijo izdelkov in boljše terapije.20262026-09-12 07:16:22Magistrsko delo/naloga187612VisID: 288648COBISS_ID: 290949379sl