Biološko vrednotenje himernih razgrajevalcev človeškega galektina-8 na celičnih linijah MDA-MB-231 in HUVECDurnik, Rebeka (Avtor) Gobec, Martina (Mentor) Smrdel, Lara (Komentor) trojno negativni rak dojkegalektin-8molekule PROTACproliferacijaangiogenezazasevanjeGalektin-8 je protein, ki je močno izražen v rezistentnih vrstah raka. Njegova visoka izraženost korelira s slabšo prognozo bolezni ter procesoma angiogeneze ter zasevanja. Ena izmed najbolj rezistentnih vrst raka dojke je trojno negativni rak dojke, za katerega tarčno zdravljenje še ne obstaja. Himerni razgrajevalci proteinov (angl. Proteolysis Targeting Chimeras – PROTAC) so v zadnjih letih postali obetavna alternativa konvencionalnim zdravilom. Sestavljeni so iz dveh strukturnih ligandov. Eden izmed ligandov veže E3 ligazo, drugi pa tarčni protein, ki je v našem primeru galektin-8. To vodi v označevanje tarčnega proteina z ubikvitinom, kar je signal, da ga razgradi več-katalitični encim proteasom. Naša domneva je bila, da bodo molekule PROTAC, ki so jih sintetizirali na Katedri za farmacevtsko kemijo (UL FFA), razgradile galektin-8 na celičnih linijah MDA-MB-231 in HUVEC ter posredno vplivale na proces angiogeneze. V magistrski nalogi smo najprej izvedli test metabolične aktivnosti na obeh celičnih linijah in ugotovili, da nobena izmed spojin opazno ne zniža metabolne aktivnosti, s čimer smo posredno sklepali, da pri danih pogojih spojine niso citotoksične. Nato smo s sistemom Operetta preverili, če molekule preidejo v notranjost celice. Ugotovili smo, da v notranjost prehajajo le spojine, ki so bile v obliki estra, torej so kot ligand za galektin-8 imele spojino AEP11. Pri spojinah, ki so prešle v notranjost celice, smo s prenosom western preverili ali povzročijo razgradnjo galektina-8 in galektina-3. Razgradnjo obeh proteinov smo zaznali le pri spojini AEP70 in le na celični liniji MDA-MB-231. V nadaljevanju smo ovrednotili ali spojine vplivajo na izločanje VEGF in IL-8, ki ju povezujemo s procesom angiogeneze. Koncentracija VEGF se je pri vseh spojinah povišala, medtem ko se je koncentracija IL-8 znižala pri spojinah AEP65 in AEP100, a razlike niso bile statistično značilne. Za konec smo na celični liniji HUVEC pogledali še vpliv spojin na sam proces angiogeneze in ugotovili, da ga spojine ne zavrejo. Če povzamemo, smo pokazali, da le ena izmed spojin (AEP70) razgradi galektin-8, vendar pa ta spojina ne spremeni nivoja VEGF in IL-8 ter ne zavre procesa angiogeneze.20262026-09-11 08:45:59Magistrsko delo/naloga187504VisID: 128694sl