Razvoj plazmidnega sistema in vrednotenje izražanja endonukleaze Cas9 v kvasovkah Hanseniaspora uvarum in Hanseniaspora opuntiaeStanovnik, Lenart (Avtor) Čadež, Neža (Mentor) kvasovkeHanseniaspora uvarumHanseniaspora opuntiaeCRISPR-Cas9plazmidni sistemtransformacija kvasovkizražanje proteinovnekonvencionalne kvasovkeV diplomski nalogi smo obravnavali vzpostavitev protokola za transformacijo nekonvencionalnih in slabo genetsko raziskanih vrst kvasovk Hanseniaspora uvarum in Hanseniaspora opuntiae. Obe vrsti sta zanimivi zaradi potencialne uporabe v mešanih fermentacijah z vrstami rodu Saccharomyces, kjer lahko prispevata predvsem k aromatični kompleksnosti vina. Za preverjanje postopka transformacije smo uporabili uveljavljen protokol za transformacijo Saccharomyces cerevisiae s plazmidom p414_HisCas9, medtem, ko smo za seva Hanseniaspora razvili prilagojen postopek transformacije z elektroporacijo. Za transformacijo smo uporabili plazmid pJJH3200_His_Cas9, ki ima mesto začetka pomnoževanja vrstno prilagojen. Transformante S. cerevisiae so uspešno rastle in po ponovitvi poskusa tudi tudi transformante H. uvarum, ko smo uporabili višjo začetno optično gostoto celic, medtem ko pri H. opuntiae transformant nismo dobili. Določanje celokupne koncentracije proteinov transformant H. uvarum je pokazalo večinoma negativne ali nizke vrednosti, zato prisotnosti in izražanja proteina Cas9 ni bilo mogoče zanesljivo potrditi. Rezultati kažejo, da je transformacija predstavnikov rodu Hanseniaspora metodološko zahtevna in da bodo za vzpostavitev zanesljivega sistema potrebne nadaljnje optimizacije transformacije, potrditve transformantov s PCR in izboljšave pristopov za detekcijo proteinov.20262026-09-06 08:15:18Diplomsko delo/naloga186877VisID: 287174COBISS_ID: 290267651sl