Vrednotenje izražanja površinskih označevalcev na izoliranih in ex vivo gojenih mišjih FOXP3+ regulatornih celicah T s spektralno pretočno citometrijoProsen, Rebeka (Avtor) Pišlar, Anja (Mentor) Pohar, Jelka (Komentor) regulatorne celice Tspektralna pretočna citometrijaFOXP3površinski označevalciavtoimunostRegulatorne celice T predstavljajo FOXP3+CD25+ podskupino CD4+ celic T, ki imajo v imunskem sistemu pomembno vlogo pri vzpostavljanju in vzdrževanju imunske tolerance. Zaradi svojega imunosupresivnega delovanja so pomembno vpletene tudi v imunopatogenezo avtoimunskih bolezni, zavrnitvene reakcije po transplantacijah ter reakcije presadka proti gostitelju. Razvoj terapij za zdravljenje teh stanj je usmerjen v celice Treg, ki predstavljajo obetaven terapevtski pristop, saj trenutno uporabljene terapije temeljijo na nespecifični imunosupresiji, ki je povezana s številnimi neželenimi učinki. Pri razvoju terapij s celicami Treg ostaja največja ovira pomanjkanje specifičnih površinskih označevalcev, ki bi omogočili izboljšano karakterizacijo teh celic. Namen naloge je bil na podlagi predhodnih rezultatov sekvenciranja RNA ovrednotiti izražanje površinskih označevalcev na celicah Treg, identificirati potencialne specifične označevalce celic Treg in določiti časovno dinamiko njihovega izražanja tekom ex vivo gojenja. Raziskovalno delo je vključevalo izolacijo celic Treg iz mišjih vranic z imunomagnetnim ločevanjem, njihovo aktivacijo z anti-CD3/CD28 kroglicami in ex vivo gojenje do petnajstega dne. Za namen natančnejše karakterizacije celic Treg smo nadgradili obstoječi panel s protitelesi za nove označevalce, ki dodatno opišejo fenotip ex vivo gojenih celic Treg. Celice Treg smo označili s fluorescenčnimi protitelesi in barvilom za določanje živosti ter jih analizirali z metodo spektralne pretočne citometrije. Analiza je bila osredotočena na štiri označevalce, ki so na ravni transkriptoma izkazovali sočasno izražanje s FOXP3, glavnim transkripcijskim dejavnikom, ki določa identiteto celic Treg. Opazili smo postopno upadanje izražanja FOXP3 skozi čas, kar nakazuje na postopno izgubo celic Treg in razmnoževanje konvencionalnih celic CD4+. Primerjava citogramov je pokazala, da je bilo izražanje preučevanih označevalcev na površini celic Treg najizrazitejše na dan 4, torej ob aktivaciji celic Treg. Med analiziranimi označevalci je označevalec 1 izkazoval najvišjo stopnjo izražanja na celicah Treg ter nizko izraženost na preostalih celicah CD4+, kar kaže na njegovo dobro specifičnost za celično populacijo celic Treg. Rezultati predstavljajo osnovo za nadaljnje raziskave pomena označevalca 1 ter njegovo morebitno uporabo pri izboljšani identifikaciji in karakterizaciji celic Treg.[R. Prosen]20262026-09-05 08:45:05Magistrsko delo/naloga186802UDK: 577.27:576(043.2)VisID: 128234COBISS_ID: 290325251sl