Aktivnost in vloga cisteinske peptidaze katepsina X v makrofagih, izpostavljenih gojišču tumorskih celicSirk, Katja (Avtor) Pišlar, Anja (Mentor) Breznik Vittori, Barbara (Komentor) makrofagirakkatepsin XenolazaRak ostaja velik zdravstveni problem, saj obsega skupino bolezni, ki jih še vedno ne uspemo vedno uspešno zdraviti. Tumorsko tkivo je kompleksen preplet celic, kjer poleg tumorskih celic najdemo infiltrirane tudi imunske celice, med katere spadajo tudi s tumorjem povezani makrofagi. Tumorsko mikrookolje naj bi makrofage aktivno usmerilo v razvoj fenotipa M2, t.i. imunosupersivni fenotip, ki pripomore k proliferaciji tumorskih celic, angiogenezi, invaziji, metastaziranju, preoblikovanju tumorskega mikrookolja ter odpornosti proti terapiji. V nekaterih tumorjih so v makrofagih fenotipa M2 zaznali povišano aktivnost cisteinske peptidaze katepsina X, ki cepi C-končni del enolaze. Enolaza je primarno glikolitični encim, ki v centralnem živčnem sistemu izkazuje nevrotrofično in nevroprotektivno vlogo. Spremembe v njunem delovanju so že povezali tako z nevrodegenerativnimi boleznimi, kot tudi z rakavimi obolenji. Vendar vloga katepsina X pri uravnavanju enolaze predvsem v tumorsko spremenjenih makrofagih še ni podrobno razjasnjena. Namen magistrske naloge je preučiti aktivnost in vlogo cisteinske peptidaze katepsina X v povezavi z določanjem ravni izražanja izooblik enolaze v makrofagih, pridobljenih z diferenciacijo monocitne celične linije THP-1 in izpostavljenih gojiščem tumorskih celic. V ta namen smo uporabili izrabljena gojišča celičnih linij glioblastoma (U87), raka dojk (MDA-MB-231), adenokarcinoma trebušne slinavke (Colo-357) in hepatocelularnega raka (HepG2). Pred izpostavitvijo smo celice THP-1 72 ur diferencirali v makrofagom podoben adherentni tip, kar smo potrdili z določanjem ravni izražanja površinskih označevalcev. Opazili smo povišano aktivnost katepsina X v diferenciranih celicah THP-1, izpostavljenih izrabljenima gojiščema celic U87 in MDA-MB-231, in hkrati po 48 urah opazili znižano izražanje obeh oblik γ-enolaze ter njuno ponovno zvišanje po 72 urah. Izrabljeno gojišče celic Colo-357 je dodatno okrepilo znižanje aktivnosti katepsina X, izrabljeno gojišče HepG2 pa je znižanje omililo. Obe izrabljeni gojišči sta povzročili tudi znižano izražanje aktivne oblike γ-enolaze ob razmeroma nespremenjenih ravneh celokupne γ-enolaze. Neodvisno od izrabljenega gojišča so celice po diferenciaciji privzele manj glikolitičen fenotip. Zaviranje katepsina X je zavrlo diferenciacijo celic ter zvišalo izražanje CD11b pri diferenciranih celicah, izpostavljenih izrabljenem gojišču celic MDA-MB-231. Podrobnejše razumevanje vloge katepsina X pri razvoju fenotipa M2 s tumorjem povezanih makrofagov ter njihove repolarizacije v fenotip M1 z uporabo zaviralcev katepsina X bi lahko prispevalo k razvoju učinkovitejšega zdravljenja rakavih obolenj.[K. Sirk]20262026-09-03 08:47:12Magistrsko delo/naloga186591UDK: 615:577:616-006(043.2)VisID: 128022COBISS_ID: 290280195sl