Primerjava protokolov za imunofluorescenčno detekcijo cirkulirajočih tumorskih celic raka dojkeKrekić, Farah Edisa (Avtor) Jesenko, Tanja (Mentor) CTCIFmarkerjizgodnji rak dojkhišni protokolGiemsaPortrait®+CTC predstavljajo pomemben biološki označevalec in omogočajo vpogled v razvoj in napredovanje bolezni. Na Onkološkem inštitutu Ljubljana smo vzpostavili metodo za izolacijo CTC iz vzorca krvi. Po izolaciji smo pripravili citološke preparate, ki smo jih nato opredelili s citopatološko analizo. Delali smo na vzorcih 10 bolnic, poprečne mediane starosti 53 let, odvzetih v klinični raziskavi GALIA. Imunofluorescenčno (IF) barvanje nam omogoča, da na istem vzorcu naenkrat označimo in opredelimo več različnih celičnih označevalcev. Zato smo razvili hišni protokol, pri katerem označujemo 4 celične označevalce. Za barvanje IF smo uporabili metanolno fiksirane preparate. Vzpostavljeni protokol pa se na vzorcih CTC, pridobljenih iz krvi bolnic z rakom dojk ni vedno izkazal za optimalnega. Predvsem smo zaznali bleda jedra in neenotno označevanje CD45. V nekaterih primerih je tudi pokazal odsotnost krvnih označevalcev, kot tudi odsotnost trombocitov. Zaradi tega smo primerjali vzpostavljeni hišni IF protokol s protokolom Portrait®+ (Portrait®+ CTC Staining Kit, CelLBxHealth plc.), ki je bil razvit in validiran za označevanje CTC. Protokol Portrait®+ vsebuje večji nabor celičnih označevalcev, kar pa je poslovna skrivnost. Pri protokolu Portrait®+ smo uporabili dve vrsti kontrolnih preparatov: enega fiksiranega v metanolu, drugega pa v acetonu. Na koncu smo slikanje izvedli s fluorescenčnim mikroskopom Zeiss Axio Observer; prikaze fluorescenčnih slik celic smo pripravili s programsko opremo Imaris. Za statistično analizo in risanje grafov smo uporabili programsko opremo GraphPad Prism, verzija 10.6.1. Pri metanolu smo opazili večjo degeneracijo celic in večji vpliv na morfologijo. Protokol Portrait®+ je imel več krvnih markerjev; bilo je prisotnega več rdečega obarvanja, ki bi ga lahko zamenjali za eritrocite, vendar v kitu ni protiteles za eritrocite. V vzorcih, pobarvanih s protokolom Portrait®+, smo določili večje število CTC in skupkov CTC kot pri barvanju s hišnim protokolom.[F. E. Krekić]20262026-09-03 07:16:50Magistrsko delo/naloga186539UDK: 618.19-006:616-07(043.2)VisID: 286702COBISS_ID: 289885187sl