Uporaba fluorescenčnega barvila FITC za spremljanje infektivnosti bakteriofagovUlaga Sterle, Cene (Avtor) Podgornik, Aleš (Mentor) bakteriofagifluorescenčno označevanjeFITCinfektivnostmetoda štetja plakov (PFU)stabilnost virusovBakteriofagi so virusi bakterij, ki se danes vse pogosteje uporabljajo v biotehnologiji, medicini in živilski industriji. Za te namene je ključnega pomena natančno in hitro določanje njihove koncentracije ter spremljanje stabilnosti skozi čas. Naše delo poskuša ovrednotiti uporabo fluorescenčnega barvila fluorescein izotiocianat (FITC) za spremljanje infektivnosti morfološko različnih bakteriofagov T4, T7 in ϕ6. Po kovalentnem označevanju njihovih kapsidnih proteinov smo merili intenziteto fluorescence. Preučili smo vpliv kemijske modifikacije na ohranjanje infektivnosti fagov ter ugotovili, da je postopek barvanja zmanjšal infektivnost bakteriofaga T7, medtem ko sta faga T4 in ϕ6 ohranila stabilen titer. Korelacija med intenziteto fluorescence in titrom PFU v svežih vzorcih je bila dobra, z najvišjo vrednostjo pri bakteriofagu T7. V drugem delu raziskave smo časovno spremljali stabilnost bakteriofagov 624 ur. Rezultati so pokazali, da sta bila tako signal fluorescence kot infektivnost, merjena s PFU, v hladilniku pri 4°C stabilna in v dobri korelaciji, na sobni temperaturi (25°C) in ob stalni osvetlitvi pa je prišlo do kritičnega razkoraka med fluorescenco in PFU. Infektivnost je sicer različno pri vseh virusih, a povsod hitro padla na nič, medtem ko je bil fluorescentni signal še vedno zaznaven. To nakazuje, da fluorescenca FITC meri prisotnost virusne biomase, ne pa biološke funkcionalnosti, kar v neoptimalnih pogojih vodi do napačnih rezultatov. Metoda je uporabna kot hitro dopolnilno orodje za sveže vzorce, medtem ko za natančno določanje titra aktivnih delcev metoda PFU ostaja nenadomestljiv standard.20262026-08-21 08:15:53Diplomsko delo/naloga185833VisID: 285317COBISS_ID: 288461315sl