Izražanje cisteinskih katepsinov v sokulturah tumorskih celic in makrofagovBajželj, Urša (Avtor) Mitrović, Ana (Mentor) rak dojketumorske celicetumorsko povezani makrofagisokulturekatepsin Bkatepsin Xkatepsin Lkatepsin VNamen magistrskega dela je bilo preučevanje izražanja in aktivnosti cisteinskih katepsinov v sokulturah s posrednim stikom, ki smo jih vzpostavili med makrofagi in tumorskimi celicami raka dojke. Cisteinski katepsini so pomembne tarče protitumornih terapij, njihovo izražanje pa je pod vplivom različnih dejavnikov TMO. V magistrskem delu smo preučevali interakcije med tumorskimi celicami MCF7 in MDA-MB-231 ter različnimi tipi makrofagov, diferenciranih iz monocitnih celičnih linij THP-1 in U937. Sokulture s posrednim stikom smo vzpostavili z menjavo gojišč med tumorskimi celicami in makrofagi. Uspešnost diferenciacije makrofagov smo potrdili s pretočno citometrijo. Izražanje cisteinskih katepsinov smo analizirali v celičnih lizatih, pripravljenih iz različnih sokultur, s primarnimi in sekundarnimi protitelesi, po ločbi proteinov z metodo NaDS-PAGE in prenosu western. Aktivnost katepsinov smo določali z metodo encimske kinetike ob uporabi specifičnih fluorogenih substratov. Rezultati so pokazali, da dodano gojišče različno vpliva na izražanje in aktivnost katepsinov v posameznih sokulturah. V makrofagih z dodanim gojiščem tumorskih celic smo v splošnem zaznali večje relativne količine katepsinov kot v obratno vzpostavljenih sokulturah, kar nakazuje, da tumorske celice v gojišče izločajo katepsine, ki jih makrofagi privzamejo vase. Vpliv gojišča makrofagov na tumorske celice je bil manj izrazit. Analiza encimske aktivnosti je dodatno pokazala razlike v aktivnosti katepsinov glede na uporabljeno gojišče in vrsto sokulture. Rezultati potrjujejo, da medcelične interakcije pomembno prispevajo k proteolitičnemu potencialu tumorskega okolja in predstavljajo pomembno izhodišče za razvoj ciljnih protitumornih terapij.20262026-07-17 07:16:45Magistrsko delo/naloga184912VisID: 282168COBISS_ID: 285247491sl