Karakterizacija mutanta α-aktinina 1 s povezovalcem med režnjema kalmodulinu podobne domeneLoborec, Mark (Avtor) Pavšič, Miha (Mentor) α-aktininaktinkonformacijske spremembekalcijAktin je eden izmed najstarejših in najpogostejših proteinov. Aktinska vlakna imajo v celici številne pomembne vloge, predvsem pri strukturi in premikanju celic. Za regulacijo in povezovanje aktinskih vlaken so odgovorni različni proteini. Eden izmed njih je tudi α-aktinin, prečni povezovalec iz spektrinske družine. Udeležen je pri regulaciji citoskeleta, deljenju in premikanju celice ter mnogih drugih procesih. Sestavljen je iz aktin vezavne domene, paličaste domene in kalmodulinu podobne domene, sestavljene iz EF12 in EF34 poddomen. V človeku poznamo štiri zvrsti α-aktinina, izmed katerih sta dve (ACTN2, ACTN3) na kalcij neobčutljivi in ju najdemo v mišicah, dve (ACTN1, ACTN4) pa na kalcij občutljivi in ju najdemo v vseh celicah. Ob vezavi kalcija na ACTN1 se temu zmanjša sposobnost povezovanja aktina v snope. Trenutno prevladujoča teorija je, da vezava kalcijevega iona na EF12 strukturo proteina stabilizira, hkrati pa povzroči vezavo EF34 na vratno regijo, kar spremeni konformacijo aktin vezavne domene in zmanjša njeno sposobnost povezovanja aktinskih vlaken v snope. Za preverjanje teorije smo izrazili mutanta z insercijo GSGS povezovalca v regijo med EF12 in EF34. Mutantu smo določili afiniteto do vezave kalcijevih ionov, sposobnost povezovanja aktina v snope v prisotnosti kalcija in termostabilnost v prisotnosti in odsotnosti kalcija. Te lastnosti smo nato primerjali s proteinom divjega tipa.20262026-07-02 12:40:00Magistrsko delo/naloga184247VisID: 25490sl