Vpliv lizosomskih zaviralcev na izražanje piruvat dehidrogenaza kinaze 1 v kulturi podganjih skeletnomišičnih celic L6Prevodnik, Cita (Avtor) Pirkmajer, Sergej (Mentor) Miš, Katarina (Komentor) piruvat dehidrogenaza kinaza 1avtofagijalizosomskeletnomišične celicedikloroacetatPiruvat dehidrogenaza kinaza 1 (PDK1) uravnava piruvat dehidrogenazni kompleks in s tem presnovo glukoze, motnje v uravnavanju pa so povezane z različnimi boleznimi. Dikloroacetat (DCA) zavira aktivnost PDK1 in hkrati zmanjša njegovo izražanje. Lizosom je odgovoren za razgradnjo znotrajceličnega materiala, ki do lizosoma pride z avtofagijo. Lizosomsko razgradnjo prek avtofagije lahko preprečimo z zaviranjem zlitja avtofagosoma in lizosoma, z zvišanjem pH v svetlini lizosoma ali z zaviranjem lizosomskih encimov. V nalogi smo preučili vpliv lizosomskih zaviralcev na razgradnjo piruvat dehidrogenaza kinaze 1 v kulturi podganjih skeletnomišičnih celic L6. Namen naloge smo strnili v tri hipoteze: 1) klorokin, amonijev klorid in leupeptin povečajo raven PDK1 v skeletnomišičnih celicah L6; 2) klorokin, amonijev klorid in leupeptin v kombinaciji bolj učinkovito povečajo raven PDK1 v skeletnomišičnih celicah L6 kot posamezni zaviralci; 3) amonijev klorid in leupeptin zmanjšata zaviralni učinek DCA na izražanje in delovanje PDK1 v skeletnomišičnih celicah L6. Poskuse smo izvedli na kulturi podganjih skeletnomišičnih celic L6. Izražanje izbranih proteinov smo določili z metodo prenos western in rezultate statistično ovrednotili. Amonijev klorid in leupeptin sta povišala raven PDK1, medtem ko klorokin ni povzročil spremembe. Kombinaciji lizosomskih zaviralcev nista pokazali večjega učinka na izražanje PDK1 kot posamezni zaviralci. DCA je zavrl aktivnost PDK1, njegova souporaba z amonijevim kloridom in leupeptinom pa je zmanjšala raven PDK1. Zaviranje lizosoma smo potrdili z zvišanjem ravni označevalcev avtofagije lahke verige 3 z mikrotubuli povezanega proteina (LC3B II) in sekvestosoma-1 (SQSTM1/p62), ki sta ga povzročila amonijev klorid in leupeptin, delovanje DCA pa z zmanjšanjem fosforilirane α1 podenote piruvat dehidrogenaze. Rezultati delno podpirajo prvo hipotezo o lizosomski razgradnji, medtem ko druge in tretje hipoteze ne podpirajo.[C. Prevodnik]20262026-06-24 07:45:07Magistrsko delo/naloga184016UDK: 616-074(043.2)VisID: 125557COBISS_ID: 282658307sl