Analiza mutacij v eksonu 12 gena JAK2 pri bolnikih s sumom na policitemijo rubra vera (PRV)Bogdan, Marija (Avtor) Gostinčar, Cene (Mentor) Stangler Herodež, Špela (Komentor) Petrovič, Uroš (Recenzent) policitemija rubra veraekson 12 gena JAK2analiza HRMsekvenciranje po SangerjuPolicitemija rubra vera (PRV) je mieloproliferativna neoplazma, za katero je značilna nenadzorovana proliferacija eritroidne linije, najpogosteje kot posledica mutacij v genu JAK2. V večini primerov je prisotna mutacija JAK2 V617F, medtem ko so pri bolnikih brez te mutacije pogosto prisotne mutacije v eksonu 12 gena JAK2. Čeprav je delež bolnikov z mutacijami v eksonu 12 relativno majhen, je njihova identifikacija izjemno pomembna, saj omogoča potrditev diagnoze PRV in pravočasno uvedbo ustreznega zdravljenja. Namen magistrskega dela je bil ugotoviti prisotnost mutacij v eksonu 12 gena JAK2 pri bolnikih s kliničnim sumom na PRV, negativnih na mutacijo JAK2 V617F, ter ovrednotiti uporabnost analize talilne krivulje visoke ločljivosti (HRM) za genotipizacijo eksona 12 gena JAK2. V raziskavo smo vključili 184 vzorcev bolnikov s kliničnim sumom na PRV, ki so bili negativni na mutacijo JAK2 V617F. Po pomnoževanju s PCR tarčne regije smo izvedli analizo HRM, na podlagi katere smo identificirali vzorce s spremenjenim talilnim profilom. Vzorce z odstopajočim talilnim profilom smo nato dodatno analizirali s sekvenciranjem po Sangerju. Rezultati so pokazali, da je analiza HRM izmed 184 analiziranih vzorcev identificirala sedem vzorcev (3,8 %) z odstopajočim talilnim profilom. Nadaljnja analiza teh vzorcev s sekvenciranjem po Sangerju je potrdila prisotnost mutacij v eksonu 12 gena JAK2 pri dveh vzorcih, kar predstavlja 28,6 % vseh s HRM izločenih vzorcev in 1,09 % vseh analiziranih vzorcev. Ugotovitve potrjujejo, da HRM predstavlja učinkovito, hitro in stroškovno ugodno presejalno metodo za genotipizacijo in prepoznavanje vzorcev s potencialnimi mutacijami, vendar sama po sebi ne omogoča dokončne identifikacije njihove vrste. Zato moramo rezultate analize HRM potrditi s sekvenciranjem po Sangerju, ki omogoča natančno opredelitev mutacij. Kombinacija obeh pristopov tako predstavlja zanesljiv in klinično uporaben model molekularne diagnostike PRV.M. Bogdan20262026-05-20 07:15:11Magistrsko delo/naloga182636UDK: 616.155.191:575.224(043.2)VisID: 279773COBISS_ID: 278717955sl