Primerjava učinkovitosti izolacije primarnih celic iz perinatalnih tkiv z uporabo dveh encimskih metodCvetko, Nina (Avtor) Zupan, Janja (Mentor) Trojner Bregar, Andreja (Komentor) primarne mezenhimske matične/ stromalne celiceperinatalna tkivaencimska izolacijakolagenazaDNazadispaza IIPrimarne mezenhimske matične/stromalne celice (MSC) predstavljajo pomemben vir celic, ki imajo velik potencial za uporabo v regenerativni medicini, tkivnem inženirstvu, naprednih celičnih terapijah zaradi svojih proliferativnih, imunomodulatornih lastnosti ter sposobnosti diferenciacije. MSC iz perinatalnih tkiv, natančneje iz amnijske membrane, popkovnice in placente, so priročen vir MSC, saj po porodu predstavljajo biološki odpadek. Njihovo pridobivanje je neinvazivno in etično nesporno, v nasprotju z nekaterimi drugimi viri MSC. Kljub dobremu terapevtskemu potencialu MSC pa ostaja optimizacija postopkov njihove izolacije eden ključnih izzivov. Izbira metode, reagentov in pogojev izolacije ima lahko pomemben vpliv na kakovost izoliranih celic, sposobnost proliferacije in sposobnost tvorbe kolonij. Namen te magistrske naloge je primerjati učinkovitost izolacije primarnih MSC iz različnih perinatalnih tkiv z uporabo dveh encimskih metod, izolacije s kolagenazo in izolacije z mešanico encimov, ki poleg kolagenaze vsebuje tudi DNazo I in dispazo II. V raziskavo smo vključili 15 darovalk iz Kliničnega oddelka za perinatologijo Ginekološke klinike Univerzitetnega kliničnega centra Ljubljana. Od vsake porodnice smo pridobili po tri perinatalna tkiva, ki smo jih uporabili za izolacijo primarnih celic z uporabo obeh metod. Celice izolirane po obeh metodah so bile gojene v standardnih pogojih za primarne humane celične kulture. Učinkovitost izolacije smo ocenili na podlagi več parametrov, in sicer s sposobnostjo celic, da tvorijo kolonije, s časom do tripsinizacije pri pasaži 0 (p0), ter s številom tripsiniziranih celic pri p0. Na podlagi teh rezultatov smo določili število učinkovito in neučinkovito izoliranih vzorcev pri obeh metodah. Testirali smo naslednje hipoteze, 1. da je učinkovitost izolacije primarnih celic enaka pri obeh metodah, 2. da je čas do tripsinizacije pri p0 enak pri obeh metodah, ter 3. da je število tripsiniziranih celic pri p0 enako pri obeh metodah izolacije. S statistično analizo smo potrdili vse tri hipoteze. Rezultati so namreč pokazali, da se uspešnost izolacije, čas do tripsinizacije pri p0 ter število tripsiniziranih celic pri p0 med izbranima metodama statistično ne razlikujejo. Pri obeh metodah pa smo ugotovili relativno nizko učinkovitost izolacije. Na učinkovitost izolacije poleg koncentracije oz. aktivnosti encimov vplivajo še številnih drugi dejavniki kot so čas inkubacije z encimi, , čas od odvzema tkiv do izolacije celic ter drugi dejavniki, ki bi jih bilo potrebno v prihodnosti natančneje preučiti.[N. Cvetko]20262026-04-25 08:45:05Magistrsko delo/naloga182147UDK: 576.5:577.15:577.08:615.36(043.2)VisID: 125244COBISS_ID: 276775171sl