Overjanje imunokemijskega testa za določanje koncentracij proteinov ST2 in REG3αLedinek, Anja (Avtor) Podgornik, Helena (Mentor) Encimskoimunska metoda na trdnem nosilcuREG3αsST2bolezen presadka proti gostiteljuverifikacijaBolezen presadka proti gostitelju predstavlja pogost zaplet po presaditvi krvotvornih matičnih celic, za katerega je značilen hiter in nevaren potek. Trenutna diagnostika bolezni presadka proti gostitelju zajema prepoznavo nespecifičnih kliničnih znakov in uporabo invazivnih diagnostičnih metod (biopsije). Stroka se intenzivno ukvarja z alternativnimi pristopi, kot je uporaba topnih bioloških označevalcev. V sklopu multicentrične študije sta bila prepoznana obetavna biološka označevalca REG3α (angl. regenerating islet-derived 3-alpha) in topni ST2 (angl. soluble suppressor of tumorigenicity 2). REG3α in topni ST2 imata v kombinaciji visoko napovedno moč za akutno bolezen presadka proti gostitelju in služita zgodnji diagnostiki ter spremljanju zdravljenja. V nalogi je predstavljen postopek overjanja metod za določanje serumskih koncentracij REG3α in topnega ST2. Uporabljena je bila encimskoimunska metoda na trdnem nosilcu. Pri delu smo sledili priporočilom Slovenskega združenja za klinično kemijo in laboratorijsko medicino za overjanje merilnega postopka in instrumenta v kliničnem laboratoriju. Za določanje serumskih koncentracij REG3α smo uporabili reagenčni komplet Ab-Match Assembly Human PAP1 (REG3α) v kombinaciji z univerzalnim reagenčnim kompletom Ab-Match Universal kit, proizvajalca MBL International Corporation. Za določanje serumske koncentracije topnega ST2 smo uporabili reagenčni komplet DuoSet ELISA Development System, Human ST2/IL-33 R (DY523B-05) in DuoSetTM Ancillary Reagent Kit 2, proizvajalca Bio-Techne R&D Systems. Na podlagi izmerjenega signala (absorbance) smo določili linearnost, ponovljivost znotraj in med serijami ter pravilnost metode. Delo smo ovrednotili po vnaprej določenih kriterijih. Vrednotili smo tudi možne interference (hemoliza, lipemija, avtoimuna hemolitična anemija, imunska trombocitopenija). Za obe metodi smo potrdili ustrezno linearnost in ponovljivost, tako znotraj serije kot med serijami, ter pravilnost. Zgoraj naštete interference smo dokazali kot neznačilne. Tekom naloge smo potrdili klinično uporabnost določanja serumskih koncentracij REG3α in topnega ST2 v sklopu predikcijskega modela za napoved verjetnosti pojava akutne bolezni presadka proti gostitelju. Tovrstno določanje bioloških označevalcev predstavlja neinvazivno alternativo trenutni diagnostiki. V nalogi so predstavljeni časovni profili spremljanja označevalcev pri bolnikih z in brez bolezni presadka proti gostitelju ter njihova interpretacija glede na klinični potek bolezni oziroma odziv na zdravljenje. S statistično analizo 31 vzorcev bolnikov smo pokazali statistično pomembno razliko v koncentracijah REG3α in topnega ST2 v vzorcih bolnikov z in brez bolezni presadka proti gostitelju (p < 0,05). V prihodnje bi bilo smiselno določiti serumske koncentracije REG3α in topnega ST2 pri bolnikih s stanji (vnetnimi boleznimi, boleznimi gastrointestinalnega trakta, avtoimunimi boleznimi), ki lahko povzročijo nespecifično povišanje koncentracij označevalcev, kar bi pripomoglo k ustreznejši interpretaciji rezultatov. Zaradi izvedbe statistične analize na zgolj 31 vzorcih bolnikov bi bilo v prihodnje priporočljivo razširiti študijo.20262026-03-28 08:45:06Magistrsko delo/naloga181253VisID: 124924sl