Vrednotenje porotvorne aktivnosti rekombinantnega proteinskega para beauveriolizina A in beauveriolizina B iz glive Beauveria bassianaMirtič Dolenec, Domen (Avtor) Kraševec, Nada (Mentor) Skočaj, Matej (Komentor) Egerolizinprotein z domeno MACPFbeauveriolzinBeauveria bassianaumetne lipidne membranerekombinantni proteinV sklopu raziskave smo želeli pridobiti topni rekombinantni protein beauveriolzin B (BlyB) v bakteriji Escherichia coli. Poleg tega smo želeli preveriti, ali proteinski par beauveriolzin A (BlyA)/BlyB tvori transmembranske pore in tako opredeliti njuno biološko vlogo. Za biokemijsko opredelitev proteina BlyB smo pripravili rekombinantni plazmidni vektor z zapisom za delecijsko mutanto BlyB (Δ25BlyB). Plazmidna vektorja z zapisoma za BlyA in BlyB smo transformirali v kompetentne celice E. coli BL21(DE3). Transformante smo dobili v obeh primerih. Protein BlyA smo uspešno izolirali in očistili z Ni-afinitetno kromatografijo ter izvedli preizkus lipidne specifičnosti s površinsko plazmonsko resonanco. Potrdili smo že predhodno dokazano, da se egerolizin BlyA močno veže na liposome, ki vsebujejo lipidne komplekse sfingomielin/holesterol (Hol), ne pa tudi na liposome, ki vsebujejo lipidne komplekse ceramid fosfoetanolamin/holesterol/fosfatidilholin (CPE:PC:Hol). Rekombinantnega proteina Δ25BlyB kljub večkratnim poskusom izolacije nismo uspeli pridobiti. Možni razlogi za neuspeh so lahko toksičnost proteina za celice E. coli ali nestabilnost proteina oziroma njegove mRNA.20262026-03-19 07:16:27Magistrsko delo/naloga180889VisID: 279146COBISS_ID: 272314627sl