Vrednotenje citotoksičnih učinkov zaviralcev signalne poti NOTCH v celičnih linijah kronične limfocitne levkemijeKrajšek, Zala (Avtor) Mlinarič-Raščan, Irena (Mentor) Markovič, Tijana (Komentor) kronična limfocitna levkemija (KLL)signalna pot NOTCHzaviralci NOTCHlimantrafinRBPJ inhibitor-1 (RIN1)sinergistično delovanjeKronična limfocitna levkemija (KLL) je neozdravljiva maligna bolezen, za katero je značilna akumulacija zrelih, vendar nefunkcionalnih limfocitov B. Je najpogostejši tip levkemije pri odraslih zahodnega sveta. Signalna pot NOTCH predstavlja novo potencialno terapevtsko tarčo za zdravljenje KLL, saj je v celicah KLL konstitutivno aktivirana in omogoča njihovo preživetje, diferenciacijo, proliferacijo in obstoj tumorskih matičnih celic. Zanimalo nas je, ali zaviranje signalne poti NOTCH modulira preživetje malignih limfocitov B, saj bi to lahko omogočilo boljše obvladovanje bolezni ter prispevalo k iskanju terapevtskih pristopov za premagovanje odpornosti na terapijo. V magistrski nalogi smo vrednotili zaviralce signalne poti NOTCH, limantrafin, RIN1, ZLDI‑8 in FLI-06. Kot eksperimentalne modele smo uporabili celične linije MEC1 in HG3 ter celične linije odporne na venetoklaks in ibrutinib, MEC1VER in MEC1IBR. Najprej smo s testom metabolne aktivnosti ovrednotili citotoksično delovanje zaviralcev NOTCH. Na podlagi vrednosti EC50 izmerjenih izpostavitvi zaviralcem NOTCH smo ugotovili, da ima ZLDI‑8 najmočnejše citotoksično delovanje. Po 24 urah so bile vrednosti EC50 v celicah MEC1 3,2 μM. V celični liniji MEC1 so bile po 48 urah vrednosti EC50 limantrafina 34,7 μM, RIN1 11,5 μM, ZLDI‑8 3,3 μM in FLI-06 4,5 μM. Ugotovili smo, da vsi proučevani zaviralci NOTCH delujejo citotoksično tudi v celičnih linijah, odpornih na venetoklaks in ibrutinib. Proučevali smo tudi potencialno sinergistično delovanje zaviralcev NOTCH s tarčnima zdraviloma venetoklaks in ibrutinib in ugotovili, da je najizrazitejše sinergistično delovanje izkazoval RIN1. Ker je signalna pot NF-κB v celicah KLL konstitutivno aktivirana, smo preverili, ali zaviralci NOTCH vplivajo na NF-κB signalizacijo v celični liniji RamosBlue. S testom QUANTI-Blue smo ugotovili, da so vsi proučevani zaviralci NOTCH znižali aktivnost signalne poti NF-κB. Nadalje smo s pretočno citometrijo proučili vpliv ZLDI‑8, RIN1 in FLI-06 na apoptozo in celični cikel. Ugotovili smo, da je glavni mehanizem celične smrti apoptoza in da zaviralci NOTCH celični cikel zavirajo v različnih fazah. Zaviralci signalne poti NOTCH delujejo citotoksično na celice KLL ter izkazujejo sinergistično delovanje s tarčnimi zdravili, zato bi jih bilo smiselno nadalje ovrednotiti kot potencialne nove kandidatne učinkovine za zdravljenje kronične limfocitne levkemije.20262026-03-17 08:45:09Magistrsko delo/naloga180808VisID: 124881sl