Pomen izražanja γ-enolaze v glioblastomskih matičnih celicah in uravnavanja njene aktivnosti s katepsinom XSinanović, Alja (Avtor) Pišlar, Anja (Mentor) Horvat, Selena (Komentor) glioblastomglioblastomske matične celicesferoidipresnovaγ-enolazakatepsin XGlioblastom (GBM) je najpogostejši in najagresivnejši primarni možganski tumor, za katerega so značilne visoka heterogenost, presnovna plastičnost in odpornost na zdravljenje. Ključno vlogo pri teh lastnostih imajo glioblastomske matične celice (angl. glioblastoma stem-like cells, GSC), ki ohranjajo sposobnost samoobnavljanja, multipotentnost in odpornost na stresne pogoje. Njihovo vedenje je tesno povezano z mikrookoljem, presnovnim stanjem in signalnimi potmi, ki uravnavajo proliferacijo, diferenciacijo in preživetje. Ena izmed molekul, ki pomembno vpliva na te procese, je γ-enolaza – encim glikolitične poti, ki ima poleg presnovne tudi signalno vlogo. Njeno delovanje uravnava katepsin X, cisteinska peptidaza, ki cepi C-končni del γ-enolaze in s tem vpliva na njeno funkcionalnost. Spremembe v delovanju obeh proteinov so bile že povezane z nevrodegenerativnimi in tumorskimi procesi, njuno medsebojno delovanje pa še ni popolnoma pojasnjeno. V okviru magistrske naloge smo s celično linijo U87 raziskali vpliv zaviranja katepsina X na izražanje in delovanje γ-enolaze ter na lastnosti, povezane z matičnostjo GSC. Celice smo gojili v treh gojiščih, in sicer kompletnem gojišču (CM), gojišču z dodanimi rastnimi dejavniki (NSM) in gojišču z odsotnostjo seruma (SFM). Uporabili smo kombinacijo morfoloških, kemijskih in celičnih analiz, s katerimi smo preučevali tvrobo sferoidov, izražanje površinskega označevalca CD133 in proteinsko raven encimov α- ter γ-enolaze. S proučevanjem vpliva zaviranja katepsina X smo celice, izpostavljene različnim gojiščem, dodatno tretirali z zaviralcem katepsina X AMS36. Rezultati so pokazali, da mikrookolje močno vpliva na rast in fenotip celic U87. Razlike med gojišči odražajo presnovno prilagodljivost celic in poudarjajo pomen aktivne oblike γ enolaze za njihovo preživetje ter maligni potencial. Zaviranje katepsina X je povečalo tvorbo sferoidov in izražanje CD133, kar nakazuje ohranjanje matičnega fenotipa. Analize so razkrile povečano raven celokupne in zmanjšano raven aktivne oblike γ-enolaze, kar potrjuje neposredno vlogo katepsina X v njeni proteolitični cepitvi. Ugotovitve nakazujejo, da katepsin X in γ-enolaza tvorita regulatorni sistem, ki vpliva na presnovo in matičnost GSC ter predstavlja novo terapevtsko strategijo pri zdravljenju glioblastoma.20262026-03-06 08:45:06Magistrsko delo/naloga180327VisID: 124852sl