Overitev metode sekvenciranja naslednje generacije za spremljanje merljivega preostanka bolezni pri akutni mieloblastni levkemiji z različico FLT3-ITDSimonič, Sara (Avtor) Podgornik, Helena (Mentor) Šućurović, Sandra (Komentor) akutna mieloblastna levkemijarazličica FLT3-ITDmerljivi preostanek boleznisekvenciranje naslednje generacijePri približno eni tretjini bolnikov z akutno mieloblastno levkemijo (AML) se pojavi mutacija v genu FLT3. Najpogostejša mutacija v FLT3 je notranja tandemska podvojitev (ITD), ki se pojavlja v eksonih 14 in 15 v področju gena, ki kodira jukstamembransko domeno FLT3. Med bolniki se ITD razlikujejo po dolžini in mestu vstavitve. Določitev prisotnosti mutacije FLT3-ITD z molekularnimi testi je ob diagnozi AML ključna za ustrezno izbiro zdravljenja. Priporočljiva je zgodnejša vključitev zaviralcev FLT3, ki delujejo tarčno. V terapiji se lahko uporabijo samostojno ali v kombinaciji s kemoterapijo. Zdravljenje je razdeljeno na indukcijsko, konsolidacijsko in vzdrževalno terapijo. Merljivi preostanek bolezni (MRD) služi kot biološki označevalec učinkovitosti zdravljenja. Opredeljen je kot količina preostalih levkemičnih celic po zdravljenju in je ključen podatek za spremljanje poteka bolezni. Omogoča zgodnjo oceno statusa remisije kot tudi verjetnost ponovitve bolezni, pripomore pa tudi pri odločitvah glede terapije. FLT3-ITD dolgo ni veljal za zanesljiv označevalec za spremljanje MRD, predvsem zaradi velike raznolikosti ITD med bolniki in nestabilnosti mutacije glede na potek bolezen. Zaradi napredka v sekvenciranju je postala molekularna zaznava FLT3-ITD MRD mogoča. Cilj magistrske naloge je bil vpeljava in overitev testa za spremljanje MRD, ki temelji na sekvenciranju naslednje generacije (NGS). Trenutno test spada med nove in raziskovalne metode za spremljanje MRD pri bolnikih s FLT3-ITD. Za overitev metode smo analizirali vzorce mednarodnih kontrol UK NEQAS in vzorce bolnikov. Z vpeljano metodo smo dobili primerljive rezultate za vzorce mednarodnih kontrol z rezultati vključenih mednarodnih laboratorijev. S tem smo potrdili točnost vpeljane metode. Izvedli smo tudi ponovljivost metode znotraj serije in med serijami. Ugotovili smo, da je metoda dovolj natančna, občutljiva in specifična, kar predstavlja pomemben napredek za spremljanje bolnikov z AML. Vse bolj občutljive metode so ključne za odkrivanje MRD pri nižjih mejnih vrednostih in za izboljšavo odločitev o zdravljenju. Prednost testa, ki je kombinacija PCR in NGS-a, je tudi relativno hitro pridobivanje podatkov ter njihovo učinkovito analiziranje s pomočjo programske opreme. Vendar pa je metoda povezana z relativno visokimi stroški analize. Z vpeljavo metode za spremljanje MRD v klinično prakso se bo bistveno izboljšala klinična obravnava pacientov z AML in FLT3-ITD, predvsem tistih, ki nimajo različic v NPM1, kjer je FLT3-ITD edini razpoložljivi označevalec za določanje MRD.20262026-01-28 07:45:25Magistrsko delo/naloga178452VisID: 124712sl