Aktivacija mišjih dendritičnih celic MutuDC1940 s konjugiranim nitastim bakteriofagom f88KEBizjak, Ela (Avtor) Bratkovič, Tomaž (Mentor) Gnidovec, Klemen (Komentor) cepivanitasti bakteriofagidendritične celiceCLEC9AqPCRCepiva imajo ključno vlogo pri preprečevanju širjenja nalezljivih bolezni. Prvi korak pri delovanju cepiv je aktivacija antigen predstavitvenih celic oz. njihovih glavnih predstavnic, dendritičnih celic. Njihova glavna naloga je vzorčenje okolice in odziv na molekularne vzorce, ki izhajajo iz patogenov, kot so na primer lipopolisaharidi in z motivi CpG bogata DNA. Po vzorčenju dendritične celice privzete antigene predstavijo efektorskim celicam imunskega sistema in spodbudijo njihovo aktivacijo, kar zahteva neposreden celični stik s specifičnimi označevalci pripadnosti in signalizacijo s citokini. Če je odziv, ki ga določen antigen sproži, dovolj močen, pride do tvorbe imunskega spomina, ki zagotavlja imunost ob ponovni okužbi z istim patogenom. Zaradi vloge dendritičnih celic pri razvoju imunosti, je mnogo raziskav usmerjenih v razvoj cepiv, ki bi antigene dostavila neposredno do dendritičnih celic. Nitasti bakteriofagi so zaradi svojih lastnosti primerni kandidati za nosilce antigenov in za specifično ciljanje celic. Njihova zgradba je enostavna, dobro razvita pa je tudi tehnologija predstavitve na bakteriofagu. So tudi imunogeni, saj v genomu nosijo nemetilirane motive CpG in – ker jih pomnožujemo v po Gramu negativni bakteriji Escherichia coli – so v proteinskem plašču prisotni sledovi lipopolisaharidov. Razvili smo konstrukt nitastega bakteriofaga f88KE, ki v fuziji s strukturnim proteinom p3 izraža peptid SnoopTag. To nam je omogočilo konjugacijo virusnih delcev z do 5 kopijami fuzijskega proteina, sestavljenega iz nanotelesa, usmerjenega proti receptorju CLEC9A, in proteina SnoopCatcher, kar omogoča specifično ciljanje dendritičnih celic. Rekombinantne bakteriofage smo pred poskusih na mišjih dendritičnih celicah očistili lipopolisaharidov. Aktivacijo dendritičnih celic smo ovrednotili z metodo qPCR, kjer smo kvantificirali izražanje genov, značilnih za aktivirane celice. Ob uporabi različnih koncentracij bakteriofaga smo dosegli različno moč aktivacije. Aktivacija je vidna že eno uro po dodatku bakteriofagov, vztraja pa vsaj 18 ur. Ugotovili smo, da ciljanje dendritičnih celic preko receptorja CLEC9A zmanjša moč celične aktivacije, vendar je ta še vedno prisotna.20252025-12-03 08:45:07Magistrsko delo/naloga176532VisID: 122227COBISS_ID: 260007171sl