Optimizacija in validacija metode za analizo histamina v živilihGregorič, Kristina (Avtor) Pogačnik da Silva, Lea (Mentor) Polak, Tomaž (Recenzent) živilabiogeni aminihistaminHPLCderivatizacijaoptimizacijavalidacijaHistamin je biogeni amin, ki nastaja z razgradnjo aminokisline histidina, kot posledice mikrobne aktivnosti, predvsem v živilih, bogatih z beljakovinami, kot so ribe, siri, meso in fermentirani izdelki. Analiza le-tega je zato v živilih pomembna, saj lahko njegova prekomerna vsebnost v povzroči resne zastrupitve. Zanesljivo določanje histamina je ključno za zagotavljanje varnosti potrošnikov in skladnost z zakonodajnimi mejami. Namen magistrskega dela je bil optimizirati in validirati metodo za določanje histamina v živilih v skladu s standardom ISO 19343: 2017, pri čemer smo zamenjali okolju škodljiv toluen z varnejšimi topili in nekoliko spremenili postopek dela. Uporabljena metoda temelji na kombinaciji znanstvene literature in standardnih postopkov, pri čemer je bil poseben poudarek na izbiri mobilne faze, pretoka, temperature ter uporabi derivatizacije. Ugotovili smo, da povečanje deleža metanola v mobilni fazi skrajša retencijski čas histamina, optimalna sestava pa je bila pri 35 % metanola. Pretok 1,0 mL/min je predstavljal najboljši kompromis med ločljivostjo in trajanjem analize, višja temperatura (40 °C) pa je izboljšala izločanje histamina brez večjega vpliva na simetrijo vrhov. Derivatizacija z dansil kloridom se je izkazala kot ključna za občutljivost metode, saj histamin brez tega koraka ni bil zaznan. Umeritvena krivulja je bila linearna (r = 0,997), potrdili smo mejo detekcije (LOD) 1,0 mg/L in mejo kvantifikacije (LOQ) 4,0 mg/L, kar je ustrezno za nadzor kakovosti živil. Validacijski rezultati (RSD < 15 %) potrjujejo zanesljivost metode pri analizi različnih matriksov, kot so ribe, siri in vina. Analize vzorcev so pokazale prisotnost histamina v suhih ribah ter v nizkih koncentracijah v siru Parmigiano Reggiano, pri čemer so bile vse vrednosti pod zakonsko določenimi mejami. Metoda tako omogoča hitro, natančno in varno določanje histamina v kompleksnih živilskih vzorcih.[K. Gregorič]20252025-10-03 07:17:41Magistrsko delo/naloga174491UDK: 543.544:547.233:641.1:615.9VisID: 267365COBISS_ID: 251669507sl