Optimizacija in validacija protokolov za dolocanje hormonskih receptorjev raka dojke na citopatoloskih vzorcih na platformi Dako OmnisKnafelj, Teja (Avtor) Kloboves Prevodnik, Veronika (Mentor) Miceska, Simona (Komentor) Rak dojkeimunocitokemijaplatforma Dako Omnisdetekcijski sistem EnVision FLEXRak dojke je najpogostejši rak pri ženskah v razvitem svetu, ki je ob zgodnjem odkritju ozdravljiv. Ženske s pozitivnim hormonskim statusom, pri katerih tumor izraža hormonske receptorje, kot sta estrogenski (ER) in progesteronski receptor (PR) dodatno zdravimo s tarčno hormonsko terapijo. Hitro opredelitev hormonskega statusa izvedemo na citospinih z imunocitokemično (ICK) analizo, vendar je ob uvedbi novih platform za ICK barvanja, kot je platforma Dako Omnis, ki je ena izmed najnovejših na trgu, nujno potrebno ICK protokole za določanje ER in PR optimizirati in validirati. Namen magistrske naloge je bil optimizirati in validirati ICK protokole za določanje ER in PR na citoloških vzorcih na novejši platformi Dako Omnis. V prvem delu naloge smo testirali različne pogoje ICK barvanja (čas inkubacije primarnega protitelesa, predobdelava pri nizkem ali visokem pH pri 65 °C ali 97 °C, dodatek ojačevalca ICK reakcije). Kot kontrolo oziroma referenčni protokol za primerjavo ICK rezultatov smo uporabili ICK protokol za ER in PR na platformi BenchMark ULTRA, ki se uporablja v rutinski citopatološki diagnostiki na oddelku citopatologije na Onkološkem inštitutu Ljubljana. Med vsemi testiranimi pogoji smo v primerjavi z referenčnim protokolom najbolj optimalen rezultat ICK barvanja za ER in PR dosegli s protokolom z 20 minutno inkubacijo primarnega protitelesa in s predobdelavo pri nizkem pH in temperaturi 97 °C ter z dodatkom komercialnega ojačevalca reakcije (mouse linker, Agilent Technologies). V drugem delu naloge smo izbrani optimiziran protokol validirali na 20 vzorcih raka dojke, pri čemer smo potrdili zelo visoko ujemanje z referenčnim protokolom in tudi z deležem izražanja ER in PR na pripadajočih histoloških vzorcih, pri čemer smo dosegli, da je izbrani protokol na Dako Omnis primeren za rutinsko uporabo v citopatološkem laboratoriju.20252025-09-27 07:15:07Magistrsko delo/naloga174072VisID: 266682COBISS_ID: 250820867sl