Določanje vpliva bakterijskih endotoksinov na proizvodni proces biofarmacevtskih izdelkovBobnar, Urška (Avtor) Bavcon Kralj, Mojca (Mentor) Kos, Špela (Komentor) Godič Torkar, Karmen (Recenzent) magistrska delasanitarno inženirstvoendotoksiniterapevtski proteincelice ovarijev kitajskega hrčkakromatografske stopnjeodstranjevanje endotoksinovUvod: Endotoksini so lahko visoko pirogene in imunogene molekule, ki izhajajo iz celične stene po Gramu-negativnih bakterij. Njihova detekcija, preprečevanje vnosa ter odstranjevanje je ključnega pomena v proizvodnji biofarmacevtskih izdelkov pri zagotavljanju varnosti in učinkovitosti zdravil. Dovoljene mejne vrednosti so strogo določene glede na način uporabe zdravila, glavni viri kontaminacije pa vključujejo ostanke bakterij, vodo, materiale, opremo in biofilme. Namen: V magistrskem delu smo preučili vpliv modelnega endotoksina na proliferacijo in viabilnost celic ovarijev kitajskega hrčka ter učinkovitost njegovega odstranjevanja z različnimi kromatografskimi stopnjami tekom biofarmacevtske proizvodnje terapevtskih proteinov. Cilj je potrditi negativen vpliv višjih koncentracij endotoksina na proliferacijo celic in dokazati, da večstopenjsko kromatografsko čiščenje učinkovito zagotavlja vsebnost modelnega endotoksina pod mejo specifikacij. Metode dela: Eksperiment smo razdelili na dva dela: (1) spremljanje vpliva različnih koncentracij endotoksina na proliferacijo in viabilnost celic ovarijev kitajskega hrčka ter vsebnost proteina, (2) ocena učinkovitosti odstranjevanja endotoksina v treh kromatografskih stopnjah (afinitetna, multimodalna, ionsko-izmenjevalna). Vsebnost endotoksina v pridobljenih vzorcih smo določali s testom Limulus amebocitni lizat. Z UV spektrofotometrično metodo smo določali vsebnost proteinov. Rezultate vpliva endotoksina na proliferacijo in viabilnost celic smo statistično opredelili z ANOVA metodo v programu JMP. Rezultati: Različne koncentracije endotoksina niso statistično značilno vplivale na proliferacijo in viabilnost celic ovarijev kitajskega hrčka (ANOVA, p < 0,005). Afinitetna kromatografija (Protein A) je vsebnost endotoksina znižala pod mejo detekcije (< 0,005 EU/mL) in dosegla logaritemski faktor odstranjevanja ? 6,2. Multimodalna in ionsko-izmenjevalna kromatografija sta dodatno prispevali k skupnemu odstranjevanju endotoksina, s kumulativnim logaritemskim faktorjem odstranjevanja 9,4. Izkoristki vseh treh kromatografij so bili skladni s specifikacijami za proizvodni proces, kar kaže, da visoke koncentracije dodanega endotoksina niso imele vpliva na ovrednotene procesne parametre. Razprava in zaključek: Modelni endotoksin statistično značilno ni vplival na proliferacijo in viabilnost celic ovarijev kitajskega hrčka. Afinitetna, multimodalna in ionsko-izmenjevalna kromatografija so skupaj dosegale visok kumulativni logaritemski faktor odstranjevanja, kar potrjuje, da je večstopenjsko čiščenje učinkovito za odstranjevanje modelnega endotoksina tekom biofarmacevtskega postopka.[U. Bobnar]20252025-09-26 07:46:09Magistrsko delo/naloga174019VisID: 152768COBISS_ID: 250774019sl