Prehod porotvornega sredstva skozi fosfolipidno membranoTinev, Megi (Avtor) Ziherl, Primož (Mentor) Božič, Bojan (Komentor) fosfolipidni dvoslojporotvorno sredstvotransmembranska poranistatinCiljno delovanje in toksičnost porotvornih antibiotikov, kot je nistatin, sta neposredno povezana z njihovo sposobnostjo prehajanja skozi fosfolipidne membrane. Da bi raziskali, ali in na kakšen način ta sredstva prehajajo skozi fosfolipidno membrano, smo razvili eksperimentalno metodo, ki temelji na merjenju časa od prenosa velikanskih unilamelarnih vesiklov (GUV) in multivesikularnih vesiklov (MVV) v raztopino porotvornega sredstva do njihovega poka. MVV-ji so sestavljeni iz notranjega (inGUV) in zunanjega (outGUV) vesikla, pri čemer čas poka vsakega določimo ločeno. Do pokov vesiklov pride zaradi hitre in številčne tvorbe por v membrani, kar je mogoče le pri visokih koncentracijah porotvornega sredstva. Vesikle smo opazovali s faznokontrastno mikroskopijo. Merilo, ki pove, ali sredstvo lahko preide skozi membrano ali ne, je razlika v času, ki ga inGUV preživi v raztopini po poku outGUV-a, v primerjavi s časom poka GUV-a enake velikosti. Če je ta čas krajši, to kaže, da je inGUV prišel v stik s porotvornim sredstvom že pred pokom outGUV-a, kar pomeni, da sredstvo prehaja skozi membrano. Na podlagi izmerjenih časov pokov smo lahko ocenili tudi spodnjo mejo membranske prepustnosti za dano porotvorno sredstvo. Z razvito metodo smo pokazali, da porotvorno sredstvo nistatin lahko prehaja skozi membrano iz POPC, ki vsebuje ergosterol (15 ali 45 mol\%), kadar je ta izpostavljena raztopini z visoko koncentracijo nistatina (250 ali 500 $\mu$M). V teh pogojih namreč pride do pokov vesiklov. Na podlagi rezultatov smo predlagali mehanizem prehoda nistatina, po katerem je prehod mogoč le, kadar nistatin v membrani tvori transmembransko poro.20252025-09-17 08:15:24Magistrsko delo/naloga173408VisID: 153725COBISS_ID: 249621251sl