Priprava rekombinantnega proteasoma hipertermofilne arheje Aeropyrum pernixKošir, Lina (Avtor) Poklar Ulrih, Nataša (Mentor) Bahun, Miha (Komentor) avtofagijabolezni staranjaEscherichia coliNaDS-PAGEproteasomproteostazašaperoniDiplomsko delo obravnava celično proteostazo – homeostazo proteinov, ki je ključnega pomena za ohranjanje preživetja celic. Gre za dinamično ravnovesje med sintezo, zvijanjem in razgradnjo celičnih proteinov. Predstavljeni so glavni sestavni deli sistema proteostaze, kot so molekularni šaperoni, ubikvitin proteasomski sistem ter lizosomsko avtofagni sistem. Podrobneje je opisan proteasom, njegovo delovanje pri evkariontih in prokariontih ter vpliv staranja na učinkovitost teh sistemov. V nalogi so izpostavljene povezave med spremembami v proteostazi in pojavom bolezni, kot so Alzheimerjeva bolezen, Parkinsonova bolezen in rak. V sklopu naloge smo pripravili rekombinantne podenote proteasoma hipertermofilne arheje Aeropyrum pernix. Ustrezne gene za dve podenoti alfa in eno podenoto beta jedrnega dela proteasoma smo pomnožili iz kromosoma A. pernix in jih vstavili v ekspresijski plazmidni vektor za sintezo rekombinantnih proteinov v bakterijah Escherichia coli. Sintetizirane podenote proteasoma smo delno očistili iz bakterij s segrevanjem celičnih lizatov. Pokazali smo, da podenota alfa v kombinaciji s podenoto beta razgrajuje preprosti peptidni substrat pri temperaturi 80 °C.20252025-09-12 07:19:08Diplomsko delo/naloga172927VisID: 263666COBISS_ID: 248966915sl