Vpliv različic v genu EGLN1 na stabilnost proteinskega produktaAvguštinčič, Nuša (Avtor) Debeljak, Nataša (Mentor) družinska eritrocitozagen EGLN1različica genaprotein PHD2stabilnost proteinovEritrocitoza (ECYT) je bolezensko stanje, pri katerem pride do povečanega števila eritrocitov in posledično višje koncentracije hemoglobina v krvi. Pomembno vlogo pri uravnavanju eritropoeze ima s hipoksijo inducirani transkripcijski dejavnik (HIF). Njegovo stabilnosti in aktivnost uravnava prolil hidroksilaza 2 (PHD2), ki je kodirana z genom EGLN1. Nekatere genetske različice EGLN1 vplivajo na zmanjšano stabilnost EGLN1/PHD2 in so posledično povezane s pojavom eritrocitoze. Namen magistrske naloge je bil preučiti vpliv dveh novih genetskih različic v genu EGLN1, c.1072C>T, p.(Pro358Ser) in c.1124A>G, p.(Glu375Gly), na stabilnost proteina PHD2. Stabilnost proteinov različic EGLN1/PHD2 (p.(Glu375Gly) in p.(Pro358Ser)) smo primerjali z divjim tipom (WT) ter s pozitivno (p.(His374Arg)) in negativno (p.(Gln157His) kontrolo. V celično linijo HEK293 smo vstavili EGLN1 z izbranima različicama in kontrolami, po 24h smo translacijo zaustavili z dodatkom cikloheksimida ter celice lizirali v časovnih točkah 0-10 ur po dodatku cikloheksimida (T0, T3, T6, T10). Uspešnost translacije smo preverili z analizo prenosa po westernu. Rezultati so pokazali, da WT in negativna kontrola ne vplivata na proteinsko stabilnost EGLN1/PHD2, medtem ko ostale različice vplivajo na zmanjšano stabilnost proteina EGLN1/PHD2. Za različici p.(His374Arg) in p.(Pro358Ser) smo dobili statistično značilne rezultate, medtem ko za p.(Glu375Gly) statistične značilnosti nismo dosegli, najverjetneje zaradi variabilnosti med biološkimi ponovitvami. S primerjalno analizo kontrolnih različic smo potrdili ustreznost izbrane metode za funkcionalno analizo različic gena EGLN1. Zmanjšana stabilnost genetskih različic nakazuje njihov vpliv na funkcijo proteina. S tem smo potrdili, da nova različica p.(Pro358Ser) potencialno vpliva na razvoj ECYT.20252025-09-05 07:15:53Magistrsko delo/naloga171968VisID: 262253COBISS_ID: 247857155sl