Presejanje in kineticne lastnosti vezave tarcnih ligandov na rekombinanten encim paraoksonaza 1Žnidaršič, Neja (Avtor) Goličnik, Marko (Mentor) paraoksonaza 1encimska inhibicijakompetitivni inhibitorjiencimska kinetikaCilj magistrskega dela je bil identificirati nove kompetitivne inhibitorje rekombinantnega encima paraoksonaza 1 (rePON1), ki bi lahko z višjo afiniteto nadomestili že znani inhibitor 2-hidroksikinolin (2HQ). PON1 je od kalcija odvisna sesalska hidrolaza, ki sodeluje v zaščiti pred oksidativnim stresom in razgradnji različnih estrov. Sprva smo z izražanjem v bakterijah E. coli ter z uporabo nikelj-afinitetne, ionsko-izmenjevalne in gelsko izključitvene kromatografije uspešno izolirali rePON1. Zatem smo izvedli spektrofotometrični presejalni test 1409 klinično odobrenih spojin iz knjižnice NMPA (angl. National Medical Products Administration) in na osnovi zmanjšanja encimske aktivnosti identificirali 25 spojin z vsaj 10 % inhibicije. Deset najbolj obetavnih inhibitorjev smo nadalje kinetično ovrednotili. Najučinkovitejša inhibitorja sta bila efavirenz (Ki = 0,93 ± 0,01 µM) in prulifloxacin (Ki = 1,39 ± 0,02 µM), ki sta izkazala 2- do 3-krat večjo afiniteto do rePON1 kot 2HQ (Ki = 2,54 ± 0,03 µM). Rezultati potrjujejo strukturno promiskuiteto aktivnega mesta PON1. Zaradi ugodnih spektroskopskih lastnosti bi bilo mogoče oba novo odkrita inhibitorja vključiti v razvoj občutljivejših luminiscentnih testov, s čimer bi prispevali k izboljšanju kvantifikacije PON1 v bioloških vzorcih.20252025-09-03 07:15:45Magistrsko delo/naloga171796VisID: 262034COBISS_ID: 247644931sl