Tarčno utišanje genov pri patogeni glivi Verticillium nonalfalfae z nanosom dsRNA in vitroGrohar, Urša (Avtor) Jakše, Jernej (Mentor) Jeseničnik, Taja (Komentor) Utišanje genovVerticillium nonalfalfaenanos dsRNAin vitro metodaGliva Verticillium nonalfalfae je patogena gliva iz rodu Verticillium sensu stricto, ki okužuje hmelj in povzroča bolezen imenovano verticilijska uvelost hmelja. Ker dosedanji ukrepi za zatiranje s fungicidi niso bili učinkoviti, smo želeli na dveh izolatih glive V. nonalfalfae, T2 in Rec, preizkusiti novo, inovativno metodo preprečevanja imenovano s pršenjem posredovano utišanje genov (»spray induced gene silencing«). Ideja temelji na podlagi znanja o mehanizmu RNA interference, ki v celici transkripcijsko ali post-transkripcijsko uravnava izražanje genov. Z nanosom dsRNA na rastlino bi tarčno utišali enega ali več pomembnih genov v patogeni glivi in tako povzročili njen propad ali oviranje rasti. V raziskavi smo tako v in vitro pogojih na micelij glive nanašali ustrezno količino tarčnih dsRNA, plošče z gojiščem inkubirali in v določenih časovnih točkah po tretiranju spremljali učinek dsRNA na rast micelija v primerjavi s kontrolo. Hkrati smo iz micelija ob vsaki časovni točki izolirali tudi celokupno RNA in z RT-qPCR metodo preverili raven izražanja tarčnih genov po tretiranju. Ugotovili smo, da ima metoda pri izolatu T2 večji potencial, saj je prišlo do večje inhibicije rasti in znižanja ravni izražanja genov kot pri izolatu Rec. Naše ugotovitve kažejo tudi na to, da bi bile za učinkovito zatiranje potrebno kontinuirno nanašanje dsRNA, ki bi bila z enkapsulacijo v nanodelce zaščitena pred zunanjimi vplivi.20252025-08-31 07:17:23Magistrsko delo/naloga171717VisID: 261895COBISS_ID: 247315203sl