Preučevanje udeleženosti katepsinov B in X v izbranih signalnih poteh v tumorskih matičnih celicah raka dojkeLičen, Jure (Avtor) Mitrović, Ana (Mentor) rak dojketumorske matične celicekatepsin Bkatepsin Xsignalne potiV magistrskem delu smo preučevali udeleženost dveh lizosomskih cisteinskih peptidaz, katepsinov B in X, v kanonični signalni poti Wnt in s kalcijem povezani signalni poti v tumorskih matičnih celicah (TMC) raka dojke. Za ta namen smo TMC izolirali iz treh celičnih linij raka dojke MDA-MB-231, MCF7 in MCF-10A neoT na podlagi njihove sposobnosti tvorbe tumorskih sfer. V izoliranih TMC smo zavirali aktivnost katepsinov B in X z uporabo nizko molekularnih reverzibilnih zaviralcev katepsina B (nitroksolin) in katepsina X (spojina Z9) ali njuno kombinacijo. V celičnih lizatih smo po ločbi proteinov z metodo NaDS-PAGE, prenosu western in detekciji z uporabo specifičnih primarnih in sekundarnih protiteles ovrednotili vpliv zaviranja katepsinov B in X na relativno količino β-katenina, SOX2, ciklina D1, CD44, c-Myc in DCLK1 v sklopu signalne poti Wnt in kalumenina v sklopu s kalcijem povezane signalne poti. Lokalizacijo β-katenina smo v celičnih lizatih dodatno preverili po frakcionaciji celic in s konfokalno fluorescenčno mikroskopijo. Zaviranje katepsinov B in X je vplivalo na relativno količino analiziranih proteinov, kar nakazuje, da sta katepsina B in X verjetno udeležena v regulaciji kanonične signalne poti Wnt in s kalcijem povezane signalne poti. Pri tem se je ob sočasnem zaviranju katepsinov B in X v TMC celične linije MCF-10A neoT statistično značilno povečala količina β-katenina v jedru TMC. Pri ostalih proteinih je prišlo do povečanja ali zmanjšanja količine, pri čemer je bil vpliv zaviranja katepsinov B in X različen pri različnih proteinih in pri TMC različnih celičnih linij raka dojke.20252025-07-18 07:15:54Magistrsko delo/naloga170843VisID: 257840COBISS_ID: 243032835sl