Razvoj metod za določanje znotrajceličnih koncentracij zaviralcev kalijevega kanala Kv1.3 in encima β-1,4-galaktoziltransferazePapež, Natalija (Avtor) Pajk, Stane (Mentor) tekočinska kromatografija visoke ločljivostimasna spektrometrijaznotrajcelična koncentracijaTekočinska kromatografija sklopljene z masno spektrometrijo (LC-MS) je ena izmed najzmogljivejših analitskih metod, ki omogoča učinkovito ločevanje, identifikacijo in kvantifikacijo širokega spektra kemijskih spojin v različnih vzorcih. V okviru magistrske naloge smo razvili in optimizirali metode na osnovi tekočinske kromatografije sklopljene z masno spektrometrijo (LC-MS) za izbrane spojine. Cilj je bil razviti analizne metode, ki so časovno učinkovite, natančne, selektivne in robustne. Najprej smo razvili metode na osnovi standardov spojin. Izvedli smo optimizacijo kromatografskih pogojev in masnospektrometričnih parametrov za vse izbrane spojine. Za optimizacijo metod in izvedbo analiz smo uporabili sistem tekočinske kromatografije Thermo Scientific Vanquish Core HPLC sklopljen z masnim spektrometer s trojnim kvadrupolom TSQ Fortis Plus. Po optimizaciji smo analizirali vzorce, ki so bili lizati celic po inkubaciji z izbranimi spojinami. V primerih, da metoda ni omogočala zaznave dovolj nizkih koncentraciji, nismo izdelali umeritvene krivulje in vrednotili linearnosti, točnost in natančnosti ter mejo določljivosti. Pri vzorcih s spojino UL-EID-11 ni bila potrebna predpriprava vzorcev, medtem ko smo pri vzorcih spojin 6, 8, 12 in 28 odstranili proteine z obarjanjem. Za spojino UL-EID-11 in spojino 6 smo razvili dovolj občutljivo metodo, ki je omogočala kvantifikacijo koncentracij analitov v vzorcih. Pri spojinah 8, 12 in 28 pa koncentracija analitov v vzorcih ni bila dovolj visoka, da bi jih lahko zaznala optimizirana analizna metoda.20252025-07-02 13:18:06Magistrsko delo/naloga170131VisID: 114977sl