Ocena učinkov mikro RNA hsa-miR-375-3p, hsa-miR-363-3p, hsa-miR-20b-5p, hsa-miR-133a in hsa-miR-31-3p na osteogeno diferenciacijo mezenhimskih matičnih stromalnih celicVeljanovska, Melisa (Avtor) Ostanek, Barbara (Mentor) Vrščaj, Lucija Ana (Komentor) mikro RNAkvantitativna verižna reakcija s polimerazoosteogenezateriparatidosteoporozaNa diferenciacijo mezenhimskih stromalnih matičnih celic (MSC) vplivajo številni epigenetski dejavniki, med katerimi imajo ključno vlogo mikroRNA (miRNA). MiRNA delujejo kot regulatorji izražanja genov, pomembnih za osteogenezo, in uravnavajo homeostazo skeletnega tkiva. Številne raziskave dokazujejo, da motnje v izražanju specifičnih miRNA niso povezane le z osteogenezo, temveč tudi z razvojem kostnih bolezni, kot je osteoporoza. Slednja predstavlja enega večjih javnozdravstvenih problemov, saj prizadene približno 200 milijonov ljudi po svetu. V magistrski nalogi smo preučevali vpliv izbranih miRNA (hsa-miR-375-3p, hsa-miR-363-3p, hsa-miR-20b-5p, hsa-miR-133a-3p in hsa-miR-31-3p) na osteogeno diferenciacijo MSC. MSC, ki smo jih uporabili kot celični model za raziskavo, so bile pripravljene z lentivirusno transdukcijo tako, da so se izbrane miRNA bodisi zvišano izražale bodisi so bile utišane. V teh celicah smo z metodo kvantitativne verižne reakcije s polimerazo v realnem času analizirali izražanje ključnih osteogenih označevalcev (ALPL, BGLAP, COL1A1 in RUNX2). Te rezultate smo kvantificirali z relativno kvanitifikacijo z metodo standardne krivulje in statistično ovrednotili s Studentovim t-testom ter jih primerjali z barvanjem po Von Kossa. Na podlagi rezultatov smo ocenili vpliv miRNA na osteogenezo MSC. Rezultati magistrske naloge potrjujejo hipotezo, da ima spremenjeno izražanje miRNA pomemben vpliv na osteogeno diferenciacijo. Med preučevanimi miRNA je hsa-miR-363-3p izkazala največji potencial kot biološki označevalec in/ali terapevtska tarča, saj smo z rezultati qPCR dobili statistično značilne razlike v izražanju osteogenih genov v primerjavi s kontrolnimi vzorci, prav tako pa so se rezultati qPCR skladali z rezultati barvanja po Von Kossa. Naši rezultati prispevajo k boljšemu razumevanju vloge miRNA v osteogenezi in njihovemu potencialu v diagnostiki ter terapiji osteoporoze. Kljub obetavnim rezultatom uporaba miRNA v klinični praksi ostaja izziv zaradi njihove nespecifičnosti, nestabilnosti in pomanjkanja učinkovitih dostavnih sistemov. Potrebne so nadaljnje raziskave na kliničnih vzorcih in modelih in vivo za boljše razumevanje ter klinično implementacijo miRNA.20252025-06-13 08:45:17Magistrsko delo/naloga169869VisID: 114828sl